2章 发酵液的预处理.pptVIP

第2章 发酵液的预处理及固液分离 一.生化分离工程的工艺流程： 二.发酵液的预处理技术： 二.发酵液的预处理技术： 二.发酵液的预处理技术： 三.凝聚和絮凝技术 凝聚技术 常用的凝聚剂 Al2(SO4)3.18H2O，AlCl3.6H2O，FeCl3， ZnSO4，MgCl2 阳离子对负电荷的胶粒凝聚能力次序为： Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ 絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子（如---COOH）或阳离子（如---NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。 它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架连接时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。 絮凝原理 絮凝作用的影响因素： 常用絮凝剂的种类： 四 杂蛋白的去除 等电点沉淀 蛋白质一般以胶体状态存在于发酵液中。胶体粒子的稳定性和其所带电荷有关。 蛋白质在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等电点。因为羧基的电离度比氨基大，故蛋白质的酸性性质通常强于碱性，因而很多蛋白质的等电点都在酸性范围内（pH 4.0－5.5）。 四 杂蛋白的去除 变性沉淀 蛋白质从有规则排列变为不规则结构的过程称为变性。 ①加热：在链霉素生产中，在pH3.0时，加热至70～75℃，维持30min，黏度降为1/6，过滤速度提高3倍。 ②加有机溶剂、表面活性剂、酸碱等。 四 杂蛋白的去除 在酸性溶液中，蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； 在碱性溶液中，能与一些阳离子，如Ag＋，Cu2＋，Zn2＋，Fe2＋和Pb2＋等形成沉淀。 变性蛋白质溶解度较小。最常用的使蛋白质变性的方法是加热。加热还能使液体粘度降低，加快过滤速度。该法只适用于对热较稳定的生化物质。 四 杂蛋白的去除 吸附 在发酵液中加入一些反应剂，相互反应后生成的沉淀物可吸附蛋白质而使其沉淀。如在四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，两者反应生成K2Zn3[Fe(CN)6]2 在枯草杆菌的碱性蛋白酶发酵液中加入氯化钙和磷酸盐等 五 不溶性多糖的去除 当发酵液中含有较多不溶性多糖时，黏度增大，固液分离困难，可用酶将其转化为单糖。 六 高价无机离子的去除 发酵液中杂质很多，其中对提炼影响最大的是高价无机离子（Ca2＋、Mg2＋、Fe2＋）等。 高价无机离子的存在，会影响树脂对生化物质的交换容量。杂蛋白质的存在，不仅在采用离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时会降低其吸附能力，而且在采用有机溶剂或两水相萃取时，容易产生乳化，使两相分离不清，在预处理时，应尽量除去这些物质。 六 高价无机离子的去除 除去Ca2＋——草酸钠 Mg2＋ ——草酸根（草酸镁溶解度稍大）或磷酸盐 Fe2＋ ——黄血盐（生成普鲁士兰沉淀） 第二节.发酵液的过滤 固液分离方法 过滤 过滤 过滤介质 过滤的常用设备： 分离实例 乳酸发酵液预处理 分离实例 透明质酸发酵液预处理 转鼓真空过滤机 ? Dry Wash Immersion Knife Cake Feed Rotary vacuum filter 转鼓真空过滤机 保证絮凝效果最佳 碱化 80℃保温3min 发酵液 变性去除杂蛋白 加适量CaCO3 调节 pH4.0 壳聚糖50mg/m3 于30℃搅拌5min 加硅藻土作助滤剂，板框过滤 滤液 活性炭 脱色 过滤， 取虑液 浓缩 （蒸发、 膜分离） 结晶 （降温至 5~10℃） 洗涤、 酸解、 脱色、 过滤 成品 * * 重点：预处理的作用及常用方法 凝聚与絮凝的原理及异同点 杂蛋白、高价无机离子的去除方法 第一节 发酵液的预处理 悬浮液的基本特性 ①细胞的相对密度与培养液相似，沉降不容易； ②可压缩性，粘稠，非牛顿流体，流动性差，不利于进行过滤、吸附、萃取等操作； 发酵液成分复杂，有些杂质对后续分离有害。 ①改善发酵液的物理性质：流变性质、颗粒粒度 预处理的目的 ②去除部分杂质：杂蛋白、多糖、高价无机离子等 ①物理性质的改善 ②杂质的去除 预处理的方法 加热（降低黏度、去除杂蛋白） 凝聚与絮凝（增大粒度） 加助滤剂（改善过滤） 去杂蛋白（等电点、变性剂、吸附） 去多糖（酶解） 去离子（沉淀） 凝聚和絮凝技术能有效地改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使聚集起来，增大体积，以便于过滤，常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理中。 凝聚是在高价无机盐作用下，由于双电