一种改进的多浆旱生植物霸王叶和根总RNA提取方法.pdfVIP

分子植物育种，2008年，第6卷，第1期，第197—200页 Molecular Plant Breeding，2008，Vo1．6，No．1，197—200 新思路、新技术、新方法 Novel ThinkingTechnology 一 种改进的多浆旱生植物霸王叶和根总I A提取方法 伍国强 席杰军 周向睿 马清 王锁民 兰州大学草地农业科技学院，兰州，730000 ’通讯作者。smwang@lzu．edu．cn 摘 要 针对多浆旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质的特点，在常规异硫氰酸胍方法的基础上进行改进， 摸索出一种霸王叶和根总RNA提取的方法。本方法主要通过在提取缓冲液中加入4％B一巯基乙醇以去除 多酚物质的干扰；用2 mol／L醋酸钠(pH 4．0)、水饱和酚和氯仿：异戊醇(24：1)抽提以去除多糖和蛋白物质。采 用该方法提取的霸王总RNA纯度高、完整性好，电泳条带清晰，OD D瑚值在1．8～2．0之间，其质量完全 可以满足进一步分子生物学研究的要求。 关键词 霸王，多酚，多糖，改进的异硫氰酸胍法，RNA提取 An Improved Method for Extracting Total RNA from Leaves and Roots of the Succulent Xerophyte Zygophyllum xanthoxylum Wu Guoqiang Xi Jiejun Zhou Xiangrui Ma Qing wang Suomin’ School ofPastoral A culture Science and Technology，LaBzhou University，LanT~oB，730000 ’Corresponding author．smwang@lzu．edu．cn Abstract An improved guanidine thiocyanate method has been developed for total RNA extraction from the leaves and roots of the succulent xerophyte Zygophyllum xanthoxylum which contains hi gh levels of polyphenolics and polysaccharides．In order to remove po1)；phenolics interference，4％ B—mercaptoethanol was added in the ex- traction buffer．2 mol／L sodium acetate(pH 4．0)，phenol and chloroform：isoamyl alcohol(24：1)were used to re- move polysaccharides and proteins．The result of formaldehyde agarose gel electrophoresis showed higher amount of 28S ribosomal RNA (rRNA)than that of 18S rRNA．OD ，oD28o ratio of obtained RNA was 1．8-2．0．All of above demonstrated that the RNA isolation protocol presented in this paper might be used to efficiently isolate highqualityRNAwithlowlevelsofcontaminants suitablefor relatedmolecular researches． Keywords Zygophyllum xanthoxylum L．，Polyphenolics，Polysaccharides，Improved guanidine thiocyanate method,RNA extraction 迄今为止，有关从植物中提取RNA方法的报道 此，提取纯度高、质量好的植物RNA并非易事。不同 很多 i et a1．，2006；孙超等，2004；Chomczynski and 植物种类或同种植物的不同组织的RNA提取方法， Sacchi，1987)。但由于植物细胞壁厚实且成分复杂， 往往需要进行优化选择。生长在干旱荒漠区的强旱 细胞内富含单宁、萜烯、色素和酚等次生代谢物及蛋 生植物霸王，其体内次生代谢物含量高，但目前有关