柠檬酸摇瓶发酵和提取by_LeMon.pptVIP

柠檬酸摇瓶发酵及提取 ;实验目的： 1、学习掌握柠檬酸液体发酵工艺 2、了解柠檬酸提取工艺 3、增强团队协作能力;柠檬酸：C6H8O7 物化性质：白色结晶粉末，无臭。 ? 熔点(℃), 153 ℃。味极酸，在潮湿的空气中微有潮解性。它可以以无水合物或者一水合物的形式存在：柠檬酸从热水中结晶时，生成无水合物；在冷水中结晶则生成一水合物。加热到78 ℃ 时一水合物会分解得到无水合物。加热至175 °C时它会分解产生二氧化碳和水，剩余一些白色晶体。所以，柠檬酸提取过程中，温度控制很重要。 ;实验原理;柠檬酸的发酵的过程;柠檬酸发酵的条件 1、合适的碳源（淀粉、麦芽糖、甘露糖等），高浓度的糖； 2、合适的pH值，黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵糖，产物以柠檬酸为主；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低； 3、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速200r/min）。;生产菌种： 黑曲霉 Aspergillus niger 半知菌亚门，丝胞纲，丝孢目，丛梗孢科，曲霉属。真菌中的一个常见种。生长适温37℃，最低相对湿度为88% 柠檬酸产量最高的菌种。且能利用多样化的碳源。 生产方法： 深层液体发酵法 发酵周期短，产率高，节省劳动力，占地面积小，便于实现仪表控制和连续化 ; 实验流程 斜面 发酵培养基 ;2C6H8O7·H2O + 3CaCO3 → Ca3(C6H5O7)2·4H2O + 3CO2↑ + H2O 中和终点pH:6.0～6.8温度：50～70℃;1、菌种：黑曲霉 Aspergillus niger 2、培养基： PDA(马铃薯葡萄糖琼脂 )培养基,发酵培养基(土豆 200g 煮汁、 蔗糖20g、NH4NO3 2g，KCl 0.15g，MgSO4 0.25g，水1000ml；pH=5 ) 3、器材：三角瓶2个，棉塞2个，纱布若干，接种环，小烧杯，水浴加热锅，离心机，离心管，PH试纸，电子天平，滤纸，大试管, 电炉（加石棉网）, 摇床, 玻璃棒，无菌tip头，移液枪，碱式滴定管，电子显微镜 4、试剂：无菌水，酚酞，0.1429～0.1430 mol/L NaOH溶液，CaCO3， 10% H2SO4， 40%蔗糖溶液;实验步骤;3、制备孢子悬液及接种 （以小组为单位） ;4、摇瓶发酵、补料及参数检测 ;5、发酵液酸度测定 ;6、柠檬酸提取（部分） ;菌丝过滤;中 和;酸解 ? 将柠檬酸钙结晶从滤纸上刮至小烧杯，??适量水调成“糊”，将小烧杯放85℃水浴中加热。 ? 根据计算，向小烧杯中慢慢加入所需10% H2SO4 ，边加边轻轻摇动烧杯，使反应进行彻底。 ? 过滤，将滤液收集到大试管（过滤时可将试管插在试管架上），滤液即为柠檬酸溶液，用于下一步浓缩结晶。 ? 滤纸上的白色物为硫酸钙结晶，显微镜下呈片状或针状。;浓缩与结晶;准备 1、 发酵培养基 2、补料用40%蔗糖溶液 配制200ml，分装于2个250ml三角瓶 3、标定用NaOH标准溶液 配制200ml，装蓝盖瓶 4、酚酞指示剂 0.1g溶于250ml 70%～90%酒精，装蓝盖瓶;计算柠檬酸发酵的转化率，即每100克葡萄糖经转化所能生成的柠檬酸克数，柠檬酸发酵的理论转化率按下列反应计算应为106.7%。 总反应式：2C6H12O6+3O2→2C6H8O7+4H2O;实验分工