的定向进化.ppt

酶分子改造技术的分类 一是基于序列的合理化设计方案，如化学修饰，定点突变等；二是利用基因的可操作性，通过模拟自然界的演化进程进行非合理化设计方案。 1993年,美国科学家Arnold F H首先提出酶分子的定向进化的概念,并用于天然酶的改造或构建新的非天然酶. 2006年, Ryota等为基因片段重组这一思想增添 了新的内容,开发出一新的突变文库构建方法———随机片段交换法( RAndomInsertional - deletionalStrand Exchangemutagenesis, RAISE) 。 酶定向进化的基本过程 主要包括：随机突变、构建突变基因文库、定向选择。 基本过程的图示： 目前酶定向进化的主要策略 1.易错PCR 技术 是指利用TaqDNA聚合酶不具有3’-5’ 外切酶活力，或改变正常PCR的反应条件的技术 在进行PCR 扩增目的基因时，使碱基在一定程度上随机错配而引入多点突变，导致目的基因发生随机突变。是一种非重组型构建突变文库的方法。 2.DNA重组技术(又称有性PCR) 是基因在分子水平上进行有性重组(sexualcombination) 。该方法由stemmer于1994年引入到蛋白质的定向进化过程中,并成功地改造了数十种具有工业用途的蛋 白质。该方法通过改变单个基因或基因家族(genefamily)原有的核苷酸序列,创造新基因,并赋予表达产物以新功能。 3.外显子改组技术 外显子改组(exonshuffling)类似于DNA改组, 两者都是在各自含突变的片段间进行交换,与DNA改组不同,外显子改组是靠同一种分子间内含子的同源性带动,而DNA改组不受任何限制,发生在整个基因片段上。外显子改组更适用于真核生物,并可获得各种大小的随机肽库。 4.基因家族重排技术 * 酶分子的定向进化 制作人：杨永亮 09级---生物工程 酶分子的定向进化 概念：模仿自然进化过程的人工进化策略。不需要事先了解蛋白质的结构和作用机制，去获得期望功能或全新功能的蛋白质或DNA。如从一个靶基因或一群相关家族基因或DNA开始，用突变或重组等手段去创建分子的多样性，然后对这多样性文库进行筛选，获得具有新功能的基因或DNA。此方法正在发展中。 酶分子的定向进化属于蛋白质的非合理设计方式。 酶分子定向进化的历史 1994年Stemmer等人首次利用基因从组技术获得了理想的突变体，开拓了酶分子定向进化的方法。 该方法主要由三个步 骤组成,即基因破碎; 添加随机短序列; 重新组装。 酶基因 随机突变 构建突变基因文库 筛选 正突变基因 反复进行 进化酶 负突变基因 单一基因 DNA重组原理图示 * * *