香蕉花叶病毒外壳蛋白基因克隆及表达载体的构建.PDFVIP

维普资讯 广 西 植 物 Guihaia 22(1)：81— 84 2002 年 1月 香蕉花叶病毒外壳蛋 白基因克隆 及表达载体的构建 杜道林 ，苏 杰 ，周 鹏 ，刘志晰 ，邓晓东 ，郑学勤 (1．海南师范学院生物系，海南海 口571158~2热带作物生物技术国家重点实验室，海南海 571101) 摘 要 ；从海南太田感染香蕉花叶病的香蕉叶片，获得香蕉花叶病毒 ，提纯其RNA，在 AMV反转录酶作用 下合成 cDNA第一链 ，经PCR扩增 ，获得一约700bp的DNA片段 ，漫I序结果显示所克隆的DNA片段包含 一 完整 的香蕉花叶病毒株系 (CMV—BHI)外壳蛋白基因，长度为 657bp，然后将此 DNA 片段 ，分别克隆到 pBI121和pKHG4质粒，构成两个吉CaMV35s启动子 (5’。端)、NOS终止子 (3。。端)和分别吉 NPTI标记基 因和NPTⅡ及 HPT标记基因的植物表达载体 (pTBB和 pTBK) 然后用rAHC18中的UBIpromoter换下 pBI121的CaMV35spromoter，构成 pBIAH；再用CMV—BHI外壳蛋白基因换下 pBIAH中GUS基 因，构成一 吉单子叶植物启动子 UP,I和NPTl标记基困的植物表达载体 (pTBBU)。从而为CMV--BHI外壳蛋 白基因 在香蕉中表达打下了基础 。 关键词 ：香蕉花叶病毒 ；外壳蛋 白基 因；克隆；测序 ；植物表达载体 中图分类号：Q943．2 文献标识码：A 文章编号：1000—3148(8002)01-0081-04 Cloningandreconstruction ofexpression vector ofthebananamosaicviruscoatproteingene DU Dao—fin ，SU Jie，ZHOU Peng。，LIU Zhi—xin。， DEN Xiao—dong。，ZHENG Xue—qin (1Departme~tofBiology，IfamanN~malCdlege，Haikou，571158．China；2．Nnf㈨ Key BiotecfinologyL~Jboratory， 7~pka ，CATAS，Haik 571101．China1 Abstract：A DNA fragmentabout700bpobtainedfrom thefirststrandofcDNA whichsvntt1esizedwithaviral RNA temp]ateextractedfrom viralparticles(CMV—BHI)isolatedfrom propagarionh。sthananalnHainanbv usingAMV reversetranscriptaseand3-endPCR primerafter35PCRamp[illcarioncyc1es ． Itwasc1onedinto T Easyvector-ThewholeDNA sequencewasdeterminedandtheresuItsshowedthattheentire ene (657 bp) 。odi“gthecoatproteinhadbeencloned，Thentwoplantexpressionvectors(pTBB andpTBK)we re re— constructed