8-液相与超临界流体色谱法.pdfVIP

色谱与电泳 Chromatography and Electrophoresis 色谱分析导论 气相色谱法 高效液相色谱法及超临界流体色谱法 毛细管电泳法 第八章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatograph （HPLC) 高效液相色谱法是在经典液相色谱中引入气相色谱理论 与技术发展起来的以液体为流动相的色谱方法。 经典液相色谱：固定相颗粒大、性质单一、人为分辨条 带。 高效液相色谱：颗粒细而规则，孔浅，高压输液，高灵 敏检测器 与气相色谱的区别：组分和固定相、流动相间均有相互 作用；气相色谱中主要是组分与固定相间的作用。 2 8.1 高效液相色谱的固定相  高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚 性固体和硬胶两大类。 8 9  刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.010 ~1.010 Pa的 高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在 二氧化硅表面键合各种官能团，可扩大应用范围，它是 目前最广泛使用的一种固定相。一般不用于pH大于8的 体系（为什么）。  硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙 8 烯与二乙烯苯交联而成。可承受压力上限为3.510 Pa 。 可用于pH8-12 的体系。 3 按空隙深度分为表面多孔型和全多孔型 1. 表面多孔型固定相 基体是实心玻璃球， 外面覆盖一层多孔活性 材料，如硅胶、氧化硅、 离子交换剂、分子筛、 聚酰胺等。死体积小， 传质阻力小，出峰快 2. 全多孔型固定相 由直径为10nm的硅胶微 粒凝聚而成。出峰快， 柱压高 材料科学、材料化学的发展与 色谱发展密切相关 4 整体柱 整体柱是在柱管内原位聚合或 固定化了的连续整体多孔结构, 可根据需要对整体材料的表面 作相应的衍生化,是一种新型 的用于分离分析或作为反应器 的多孔介质。多为硅橡胶结构。 5 高效液相色谱的流动相 流动相溶剂的要求： （1）纯度高：固体颗粒和杂质，会堵塞通道、引起基线不 稳，或产生“伪峰”； （2 ）低粘度：（粘度适中，丙酮、甲醇和乙腈等），若粘 度过高，压力增高，不利于分离。但粘度过低的溶剂 （戊烷、乙醚）也不合适，它们容易在色谱柱或检测器 内形成气泡，影响分离； （3 ）化学稳定性好，沸点要高于55°C ：低沸点容易形成 气泡； 6 流动相溶剂的要求： （4 ）溶剂对于待测样品必须具有合适的极性和良好的溶解 性和选择性。 （5）溶剂与检测器匹配 紫外吸收检测器—