缺氧刺激对人骨髓间充质干细胞凋亡基因Bcl-2和Bax影响.pdfVIP

中文摘要 缺氧刺激对人骨髓间充质干细胞凋亡基因 BcI一2 j}口Bax的影响 摘 要 目的：在牙周病及正畸临床中，牙槽骨组织的改建是牙 周愈合、牙齿移动的关键，由成骨和破骨两大效应细胞共同 作用完成。目前的研究认为成骨细胞在骨改建机制中处于 “中心调控地位”，其分化和功能是骨改建的核心内容。成 骨细胞属于结缔组织细胞，在体内无增殖能力，起源于多能 stem 的骨髓基质的间质细胞。问充质干细胞(mesenchymal cells，MSCs)是目前倍受关注的一类具有多向分化潜能的成 体干细胞，其广泛分布于各种不同的组织中。在体外不同的 理化环境和细胞因子的诱导下，MSCs具有可分化为成骨细 胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞甚至神经元样细胞等多 系分化潜能。现已证实在骨特异性的转录因子核心结合因子 factora (corebinding 化。在其分化过程中，受到多种因子和激素的调节。MSCs在 体内的增殖和凋亡决定局部成骨细胞的补充速度。 Bcl．2和Bax是一对重要的癌基因，它们对体内多种细 胞的凋亡有调控作用。Bax基因具有促进细胞凋亡的功能， 成了细胞凋亡的正负调控。 组织细胞缺氧是临床多种疾病发生、发展及组织改建等 所共有的病理生理基础，它同时也调节细胞的许多基因功能 表达。正畸过程中施加的机械力在牙槽骨和牙根之间造成局 中文摘要 部缺氧。在牙周病的愈合、骨缺损的修复过程中也存在着低 氧的微环境。局部微环境缺氧是启动骨改建的重要因素之 一。如何在缺氧的病理状态下维持成骨细胞的分化、增殖及 凋亡之间的平衡，是骨组织修复改建的一个重要因素。成骨 细胞在体内无增殖能力，MSCs作为成骨细胞的种子细胞是 近年的研究热点。 本研究运用蛋白免疫印迹检测缺氧对人骨髓间充质干 bone stem 细胞(humanmesenchymal 出现凋亡的发生机制，从而为进一步阐明骨改建机理奠定实 验基础。 方法：本研究把hBMsCs按不同氧浓度及不同作用时间 分组，采用Western blotting分析，检测不同作用时间的缺 的影响。 1hBMSCs的缺氧处理及实验分组 按不同氧浓度分为对照组和缺氧组，每组设置6h、12h、 24h、48h四个时间点，每点4个复孔。 2细胞总蛋白的提取 将不同处理组的hBMSCs加入细胞裂解液中冰浴3 min，使细胞充分裂解、低温离心，弃沉淀；收集上清液分 装转移入新的Eppendof管中，--70。C贮存备用。 3细胞总蛋白定量 中文摘要 nm。计算各样本的 plus设定BCA蛋白定量程序，波长560 蛋白浓度，将定量后的蛋白质样本加入5xSDS凝胶上样缓 冲液，置于100℃水浴，煮沸3分钟，--20℃保存待用。 4蛋白免疫印迹 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：制备10％分离胶和5％浓缩 胶，灌注；按预定顺序及蛋白定量换算加样。转膜，结束后 将凝胶进行考马斯亮蓝染色，以检查蛋白质是否转移完全， solution中；同时可用丽春红染色膜观 凝胶保存于Swelling 察转膜效率。免疫染色。化学发光检测信号表达，显影定影 扫描成像。抗体洗脱；重复孵育另外一种一抗。结果图像分 析。 5统计分析 SPSSl0．0统计软件对数据进行统计处理，实验结果以 Mean±Standard t-test对 deviation(SD)表示，采用Student’S 各时间点相对应两组Bcl．2、Bax表达作两两比较，PO．05 认为有统计学差异。 结果