病毒核酸纯化试剂盒说明书及相关解析.docVIP

病毒核酸纯化试剂盒说明书 产品组成 病毒核酸纯化试剂盒 Cat. No. 5次样品 4002005 50次制备 4002050 核酸纯化柱 2 ml离心管 蛋白酶K贮存液 Carrier RNA Buffer VL Buffer WB（浓缩液） Buffer TE 说明书 5个 5个 120μl 40 μl 1.5 ml 1.5ml 0.5 ml 1份 50个 50个 1.2 ml 400 μl 15 ml 6.5ml×2 5 ml 1份 产品储存 蛋白酶K贮存液和Carrier RNA请于℃贮存。℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品贮存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品适合从血浆、全血、无细胞体液（包括血浆、血清、尿液、CSF及细胞培养上清）、病毒原液和感染病毒的组织中提取各种病毒RNA或病毒DNA。用本试剂盒最高可从病毒拷贝数为50copies/ml的体液样品（DNA病毒）中检测到病毒核酸。与传统的煮沸法提取病毒DNA相比，检测灵敏度可提高10-50倍；与传统Trizol法提取病毒RNA相比，检测灵敏度可提高5-10倍。被溶解的病毒中的核酸结合到纯化柱上后，Buffer WB洗涤去除残留在纯化柱上PCR抑制物，然后用Buffer TE洗脱，即可用于PCR或RT-PCR反应。 用户需自备的试剂与物品 无水乙醇 1.5ml离心管（推荐选用DNase-free RNase-free的1.5ml离心管） 移液器吸头（为避免样品间的污染，请选用含有滤芯的DNase-free RNase-free移液器吸头） 一次性手套及防护用品和纸巾 台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 水浴锅与旋涡震荡器 可能需要生理盐水 使用前准备 1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 2）将水浴锅温度设置到56℃操作步骤 样本使用前处理 A 血浆、血清、无细胞体液、病毒原液、尿标本、脑脊液、疱疹液、CSF及细胞培养上清 直接吸取200 μl标本进行病毒核酸的分离纯化；如果标本体积不足200 μl，则补加PBS溶液至200 μl。 * 尽量采用新鲜分离的或者冻融不超过一次的进行病毒核酸的分离纯化。 漱口液μl咽拭子洗液、生殖道拭子洗液、漱口液1.5 ml离心管中μl上清液进行病毒核酸的分离纯化。 C感染病毒的组织的裂解液： 取10 mg 感染病毒的组织进行液氮研磨，研磨后的组织加入300 μl PBS溶液悬浮，吸取200 μl组织悬浮液进行病毒核酸的分离纯化。 D粪便 在1.5 ml离心管中加入1ml 生理盐水，用灭菌的牙签挑取约200 mg左右（如果粪便呈液体状，直接吸取200 μl粪便），加入到1.5 ml离心管中，旋涡振荡直至粪便完全分散开来。12000 rpm 离心1. 在1.5 ml离心管中加入20 μl蛋白酶K贮存液，* 如果μl，补加生理盐水使体液样品终体积为200 μl。 * 不要将蛋白酶K直接加入到Buffer VL中。2. 加入200 μl Buffer VL，旋涡振荡约15秒混匀。 . 将离心管置于56°C水浴1分钟。. 加入0 μl无水乙醇，温和地翻转46次混合均匀。. 吸取步骤中的溶液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 注意不要将溶液沾到纯化柱管口的边缘上，以免后续的洗涤步骤不能洗净纯化柱。. 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入700 μl Buffer WB, 盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 滤液无需彻底弃尽，避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。* 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将000 rpm 离心，以免管盖脱落而损伤离心机。℃备用。 杭州新景生物试剂开发有限公司区 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F 邮编：310030 电话：0571传真：0571 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.3