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蛹虫草菌液体培养基配方优化探究摘 要：利用L9（34）正交试验设计，研究了蛹虫草菌液体培养基不同营养成分对蛹虫草菌丝生长干质量的影响，以对蛹虫草液体培养基配方进行优化。结果表明，蛹虫草液体培养基最佳配方为：玉米粉1%、麦麸1%、葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、维生素B1 10 mg?L-1。蛹虫草菌最终菌体总干质量达到14.85 g?L-1。 关键词：蛹虫草菌；液体培养；碳源；氮源；最佳培养基 中图分类号：R17 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.04.030 Optimization of Cordyceps sinensis Liquid Medium ZHANG Zhi-jin，MAO Ning (Provincial Key Laboratory for Protection and Utilization of Longdong Bio-resources in Gansu Province, Qingyang, Gansu 745000, China) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Different nutrient component in the liquid medium were used to study the effects on the dry weight of fruit body and to get the optimized medium. The results showed that the maxim fruit body yield（14.85 g?L-1） was obtained on the medium of corn starch1%, wheat bran 1%, glucose 2%, peptone 2%, yeast extract 0.5%, KH2PO40.1%, MgSO40.05%, vitamin B1 10 mg?L-1. Key words: Cordyceps sinensis; liquid fermentation; carbon source; nitrogen source; best medium 蛹虫草（Cordyceps sinensis）也称北冬虫夏草、北虫草，属真菌门（Eumycota），子囊菌亚门（Ascomycotina），核菌纲（Pytenomy），肉座菌目（Cordycepsmilitaris），麦角菌科（Clavicipitaceae），虫草属（Cordyceps），与冬虫夏草是同属异种[1-3]。蛹虫草分布广泛，主要分布于中国、美国、俄罗斯、日本等。在我国，主要产自吉林、河北、陕西、安徽、广西、云南、广东、四川、贵州等省区，生于针、阔叶林或混交林地表土层中鳞翅目昆虫的蛹体上，其成分、药用价值等同于资源稀少、生长条件苛刻的冬虫夏草，是冬虫夏草的理想代用品[4-5]。然而蛹虫草菌种容易变异，稳定性差，转色调控不易掌握，人工栽培形成子座难度大[6-7]。为了解决这个难题，笔者以蛹虫草菌液体培养获得最大菌体量为响应值[8-10]，研究确定蛹虫草菌液体培养基最佳配方，为蛹虫草产业开发利用提供新的途径。 1 材料和方法 1.1 供试菌株 菌种购于华中农业大学微生物研究室。 1.2 培养基 1.2.1 母种培养基 采用PDA综合培养基。 1.2.2 氮源测定基础培养基 蛋白胨0.5%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，维生素B1 10 mg?L-1，自来水100 mL， pH值6～6.5。 1.2.3 碳源测定基础培养基 葡萄糖2% ，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，维生素B1 10 mg?L-1 ，自来水100 mL， pH值6～6.5。 1.2.4 试验培养基 将碳源基础培养基中的葡萄糖分别以蔗糖、乳糖、麦芽糖、可溶性淀粉、玉米粉所替代，进行蛹虫草菌丝生长碳源试验;将氮源测定基础培养基中的蛋白胨分别以酵母膏、硫酸铵、麦麸、黄豆粉、尿素代替进行氮源试验。 1.2.5 优化培养基 试验以玉米粉（A）、葡萄糖（B）为复合碳源；以麦麸（C）、蛋白胨和酵母膏（D）为复合氮源，采取四因素三水平正交试验法，对蛹虫草菌丝体液体培养基进行优化。 1.3 方 法 1.3.1 固体培养方法 将0.3 cm2的蛹虫草菌种块接种于PDA斜面，在21°C条件下恒温培养至斜面长满，得一级菌种，备用。 1.3.2 碳源筛选试验 取一级蛹虫草菌种块0.5 cm2，分别接种于6种不同的碳源培养基上，于21 ℃条件下静置培养15 d，每次试验重复5次。 1.3.3 氮源筛选试验 取蛹