反相高效液相色谱法快速测定7种四环素类抗生素.PDFVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 1 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 52～54 反相高效液相色谱法快速测定 7 种四环素类抗生素 王　蕾　徐智秀　张孝松　邵学广 ( 中国科学技术大学化学系 ,合肥 230026) 摘 　要 　建立了一种反相高效液相色谱梯度洗脱分离测定四环素类药物的新方法。采用 DiamonsilTM C18 ODS ( μ ) 250 mm ×4. 6 mm i. d , 5 m 色谱柱 , 以甲醇乙腈0. 01 mol/ L 草酸为流动相 ,流速 1. 0 mL/ min ,270 nm检测 ,在 10 min 内分离检测四环素等7 种化合物。同时还研究了流动相组成、梯度条件、pH 值、草酸浓度等因素对分 离效果的影响。 关键词 　反相高效液相色谱 ,四环素类抗生素 ,紫外检测 ,梯度洗脱 1 　引　　言 四环素类药物属广谱抗生素 ,但在发挥药效的同时对人体有较大的毒副作用 , 因此 ,对四环素类抗 生素的检测具有非常重要的意义。目前四环素类抗生素的含量测定方法有微生物法、紫外法1 、TLC 法、高效液相色谱法及高效毛细管区带电泳法等2 。本文在文献工作3 ～6 的基础上 ,建立了以甲醇乙腈 0. 01 mol/ L 草酸为流动相、梯度洗脱的反相高效液相色谱方法 ,并应用于实际样品的分析 ,取得了满意 的结果。 2 　实验部分 2. 1 　仪器 ( ) ( LC6A 高效液相色谱仪 ,SPD6AV 紫外可见检测器 日本岛津公司 ;PH3B 精密 pH 计 上海雷磁仪 ) ( ) ( ) 器厂 ; 电子天平 Sartorious 公司 ;M50 型玻璃过滤器 上海玻璃仪器厂 ;ADDA 卡和 PC 兼容机。 2. 2 　试剂与样品 四环素( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) TC 、土霉素 OTC 、金霉素 CTC 、多西环素 DC 、美他环素 MTC 、脱水四环素 ATC 、脱 ( ) ( ) 水差相四环素 EATC 均由中国生物制品检定所提供 ; 市售四环素、土霉素片 ; 乙腈 色谱纯 ; 甲醇、盐 ( ) 酸、草酸 分析纯 ;水为二次蒸馏水。 称取适量标准样品 , 由甲醇盐酸水混合液溶解 ,二次水稀释配制成标准溶液 ,样品由市售四环素 和土霉素片配制。经 0. 22 μ m 的滤膜过滤 ,保存于 4 ℃的冰箱。 2. 3 　色谱条件 色谱柱 :DiamonsilTM C ODS (250 mm ×4. 6 mm. i. d , 5 μ ) ( 18 m ;流动相 : 甲醇乙腈0. 01 molL 草酸 pH 2. 0) 在