分子试验的验证要求.pdfVIP

临床分子诊断临床分子诊断临床分子诊断临床分子诊断 方法学验证要求方法学验证要求方法学验证要求方法学验证要求 关关 明明 复复旦大学附属华山医院检验医学科大学附属华山医院检验医学科 主要内容主要内容主要内容主要内容 ••什么是验证什么是验证什么是验证什么是验证 ？？？？自建项目自建项目 ？？商业化项目？商业化项目？ ••如何做验证？如何做验证？ 步骤和实施路径步骤和实施路径 ••举例说明举例说明举例说明举例说明 JAK2 V617FJAK2 V617F突变方法的建立突变方法的建立突变方法的建立突变方法的建立 分子诊断面临的挑战分子诊断面临的挑战 • 涉及方法较多，如PCR、荧光定量PCR、MLPA、测序等； • 实验步骤较多实验步骤较多，，包括标本的分离保存包括标本的分离保存、、处理处理、、检测检测；； • 手工程度较高，自动化程度普遍偏低，较多依赖手工，不同 的实验室条件和操作者等因素对实验结果的影响较大； • 尚未建立公认的质量管理标准等； • 更高的准确性要求更高的准确性要求；； • 结果报告缺乏标准化； • …… 这些基地将为个体化医学相关检测这些基地将为个体化医学相关检测工作制作制 定国家行业标准，并面向相关从业人员展 开规范化、标准化的培训工作，为我国个 体化医学研究与应用提供宝贵经验，大大 加快我国分子诊断的进程。 CONTENTSCONTENTS • SUMMARYSUMMARY OFOF CHANGESCHANGES • UNDERSTANDING THE 2010 CAP ACCREDITATION CHECKLIST COMPONENTS • HOW TO INSPECT USING R.O.A.D INSPECTION TECHNIQUE • ADDITIONAL INFORMATION • APPLICCABILITY • PROFICIENCY TESTING • QUALITY MANAGEMENT AND QUALITY CONTROL GENERALGENERAL ISSUESISSUES PROCEDURE MANUAL ASSAY VALIDATION REQUISITIONS SPECIMENSPECIMEN HANDLINGHANDLING SPECIMEN PROCESSING QUANTITATIVE ASSAYS: CALIBRATION AND STANDARD REAGENTSREAGENTS CONTROLS ANALYSIS Extraction AAmplifilificatition Restriction Endonucleases Sequencing DetectionDetection MethodsMethods Agarose and Polyacrylamide Gel Electrophoresis Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Arrays “VerificationVerification”和和 “ValidationValidation” Verification (确认确认）） “通过提供客观证据证明特定的要求已得到满足” • 当已经存在合适的性能参数时候，有必要明确在实验室内新 的试验符合参数规定，这个过程叫确认。 • 正确地做某个试验正确地做某个试验 （（ththe ttestt iis bbeiing perfformedd correctltly ））. • 其他确认的应用包括：采用某个实验室已经建立的技术开展 新试验新试验 （（为为一个新的基因测序个新的基因测序））；或者开展某个已经在其他