实验3毛细管柱—气相色谱法测定食品中脱氢乙酸.docVIP

实验3 毛细管柱-气相色谱法测定食品中脱氢乙酸 脱氢乙酸(DHA)是广谱防腐剂,特别对霉菌和酵母的抑菌能力强,为苯甲酸钠的2~10倍。我国的食品添加剂使用卫生标准GB 2760-2007中规定脱氢乙酸及其钠盐在酱菜、发酵的豆制品等中最大使用量为0.3 g·kg-1,在糕点、馅料等中最大使用量为0.5 g·kg-1。我国市场上很多食品中发现有脱氢乙酸,而且有过量使用和超范围使用的现象。目前我国对脱氢乙酸的标准检测方法为气相色谱法和液相色谱法等。 采用苯甲酸作为分析保护剂,用毛细管柱-气相色谱法测定食品中脱氢乙酸的含量。加入保护剂提高了方法的灵敏度和重复性。方法操作简单、检出限低、重复性好,节省有机溶剂,具有良好的应用前景,同时分析保护剂的使用也为极性物质进行气相色谱分析提供了参考。 脱氢乙酸分子能够发生式(1)所示的烯醇式重排而显弱酸性,不加保护剂时,脱氢乙酸很容易在气相色谱系统中被吸附,甚至20 mg·L-1标准溶液也不出峰或严重拖尾。 (1) 1　试验部分 1.1　仪器与试剂 HP 6890气相色谱仪,配火焰离子化检测器。脱氢乙酸标准储备溶液:称取脱氢乙酸(纯度不低于98.0%) 0.250 0 g,置于10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配成质量浓度为25 g·L-1标准储备溶液,4℃下保存。脱氢乙酸标准溶液:取标准储备溶液2.0 mL置于50 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,配成1 000 mg·L-1标准溶液。 脱氢乙酸标准工作溶液:使用前用脱氢乙酸标准溶液稀释配制,溶液中含苯甲酸溶液2 g·L-1, 2%(体积分数,下同)乙酸溶液。 苯甲酸溶液:称取苯甲酸0.500 g置于带磨口的10 mL刻度管中,用乙腈定容至10 mL,配成50 g·L-1苯甲酸溶液。 乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。无水硫酸镁在使用前于550℃烘4 h;试验用水为超纯水。 实验样品：添加了脱氢乙酸及其钠盐的酱菜或发酵的豆制品。 1.2　色谱条件 色谱柱:HP-5弹性石英毛细管柱(0.32 mm×30 m,0.25μm);载气为氮气,流量为2.5 mL·min-1,恒流模式;尾吹气为氮气,流量为40 mL·min-1;检测器温度为280℃,空气流量为400 mL·min-1,氢气流量为40 mL·min-1;进样口温度为230℃,不分流进样,0.75 min后打开分流阀,进样量为1μL;柱温升温程序:初始温度70℃, 以10℃·min-1速率升至170℃; 后运行: 270℃保持5 min。采用外标法定量。 在色谱条件下进行测定,脱氢乙酸的质量浓度在2.5~1000 mg·L-1范围内与峰面积呈线性关系, 方法的检出限(3S/N)为2.0 mg·L-1,方法的测定下限(10S/N)为0.005 g·kg-1。 试验方法 1.3.1标准曲线 用乙腈配制2.5, 5.0, 20.0, 100.0, 500.0, 1 000 mg·L-1脱氢乙酸标准溶液,使溶液中苯甲酸质量浓度为2 g·L-1,乙酸体积分数为2 %。以脱氢乙酸浓度或质量为横坐标，峰面积为纵坐标，做标准曲线，并进行线性回归，求出线性回归方程和相关系数。 含水较少的样品(糕点、馅料等): 称取样品5.000 g置于50 mL塑料离心管中, 加入用乙腈饱和的氯化钠溶液10 mL,氯化钠固体4~5 g,冰乙酸200μL, 乙腈5 mL,剧烈摇振1 ~ 2 min,以4 500 r·min-1转速离心3 min, 取上层乙腈溶液2.00 mL置于10 mL离心管中,加入50 g·L-1苯甲酸溶液80μL和无水硫酸镁300 mg, 涡旋30 s,以4 000 r·min-1转速离心2 min, 取上清液用0.45μm滤膜过滤,取滤液进行测定。 含水较多的样品(泡菜、果汁等): 称取样品10.000 g置于50 mL塑料离心管中,加入冰乙酸250μL, 乙腈10 mL,混匀后加入无水硫酸镁4 g和氯化钠1 g, 立即剧烈摇振1~2 min, 以4 500 r·min-1转速离心3 min, 取上层乙腈溶液2.00 mL置于10 mL离心管中,加入50 g· L-1苯甲酸溶液80μL和无水硫酸镁300 mg, 涡旋30 s, 以4 000 r·min-1转速离心2 min,取上清液用0.45μm滤膜过滤,取滤液进行测定。 结果与讨论 求出待测样品中脱氢乙酸的含量，并讨论其安全性。