实验一色谱知识和气相色谱仪的使用.docVIP

实验一 色谱知识及气相色谱仪的使用 实验目的 1 了解色谱法的基本知识 2 掌握色谱图的基本知识 3 掌握气相色谱仪的结构、原理、操作方法 4 掌握色谱定性、定量的基本方法 实验原理 色谱法（chromatography），是利用不同物质在不同相态的选择性分配，以固定相对流动相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果是一种利用混合物中诸组分在两相间的分配原理以获得分离的方法。“色谱分析”、“色谱分析法”、“层析法”，是一种分离和分析方法，在、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。气相色谱gas chromatography）是用气体作为流动相的色谱法。气相色谱系统由气源、色谱柱和柱箱、检测器和记录器等部分组成。气源负责提供色谱分析所需要的载气，即流动相，载气需要经过纯化和恒压的处理。气相色谱的色谱柱一般直径很细长度很长，根据结构可以分为填充柱和毛细管柱两种柱箱是保护色谱柱和控制柱温度的装置，在气相色谱中，柱温常常会对分离效果产生很大影响，程序性温度控制常常是达到分离效果所必须的。检测器是气相色谱带给色谱分析法的新装置，在经典的柱色谱和薄层色谱中，对样品的分离和检测是分别进行的，而气相色谱则实现了分离与检测的结合，随着技术的进步，气相色谱的检测器已经有超过30种不同的类型。记录器是记录色谱信号的装置，现在记录工作都已经依靠计算机完成，并能对数据进行实时的化学计量学处理。气相色谱被广泛应用于小分子量复杂组分物质的定量分析。色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）. 基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于。 噪音（noise）――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ）.前者少见。 被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也既从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间，用R表示，常以分（min）为时间单位。pa,空气的压力为50 Mpa，载气为高纯氮（≥99.999%）压力为400-600 Mpa，柱温初始温度为50℃，保持1min，然后以20℃/min程序升温至150℃，检测器温度200℃，进样口温度190℃。 3.溶液的配制：取甲醇标品0.1g(0.0001g)，用60%乙醇水溶液定容于100mL的容量瓶中，摇匀，得到1mg/mL的标准储备液。取标准储备液0.2、0.4 、0.6mL用60%乙醇水溶液定容于100mL的容量瓶中，得到浓度为2.0、4.0、6.0ug/mL的标准溶液。 3.标准曲线的制作：按上述色谱条件，将标准溶液分别注入气相色谱仪，得到色谱图。 4.样品的测定：按上述色谱条件将白酒试样注入气相色谱仪1微升。根据保留时间确定甲醇峰的位置，并记录甲醇峰的峰面积。连续进样三次，计算平均值。 实验数据处理： 标准曲线： 浓度 2.0 4.0 6.0 峰面积 保留时间TR= 线性方程： 相关系数： 2.样品中甲醇含量的测定 a. 定性： b. 定量： 实验三 高效液相色谱法检测未知液中三聚氰胺的含量 实验目的： 1.掌握高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺的原理、方法 2.掌握高效液相色谱仪的原理、构造及使用方法 实验原理：高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法 (High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。 HPLC有以下特点： 高压- 压力可达 150~ 300kg/cm2，色谱柱每米降压为 75kg/cm2以上 高速- 流速为0.1~10.0mL/min 高效- 理论板数可达10000