实验二 血红蛋白和其衍生物吸收光谱和.pptVIP

实验二 血红蛋白及其衍生物的吸收光谱及定量测定 ;一、目的要求;二、实验原理; 本实验先制备Hb及其衍生物，然后在不同波长下测其光吸收度，以吸光度（A）（又称光密度）为纵坐标，波长为横坐标绘制成吸收光谱曲线，由此可以确定它们最大的吸收波长。 ;三、仪器和试剂; ;基本原理; 朗伯比尔定律： A=εlc;操作方法;;注意事项; 比色皿的使用方法;;四、实验步骤 ;2．吸光度测定及吸光光谱曲线的绘制： （1）将如上制备的2种血红蛋白液分别盛于比色杯内，在722型分光光度计上以蒸馏水为空白调节吸光度零点和100%（每一次读数均应用空白管调节零点和100%）。 （2） 先从波长500~600nm分别测定HbO2，碳氧血红蛋白的吸光度（在相应峰值的10nm范围内每隔2nm记录一次吸光度读数，其余均每隔10nm记录一次吸光度读数）。 （3）然后以吸光度为纵坐标，波长为横坐???描点，并将各点连接成曲线，即为血红蛋白及其衍生物的吸收光谱，但由于使用仪器不同，绘制出的血红蛋白及其衍生物的吸收光谱必有一些差异，对722型分光光度计来说，峰值误差在±3nm~5nm波长内是允许的。;思考题