钙离子对小麦氯化钠胁迫培养缓解作用.docVIP

植物生理学实验技能测试 （设计性实验） 姓 名： 学 号： 班 级： 10农业资源与环境 实验时间：2012.05.30—2012.06.20 外源Ca2+子对小麦氯化钠胁迫培养的缓解作用 一、实验目的 1、 了解盐胁迫对植物的生理效应； 2、 掌握钙离子对小麦氯化钠胁迫培养缓解作用的实验原理及方法； 3、 通过对小麦生理指标的测定，了解钙离子对小麦缓解作用； 4、巩固测定植物叶绿素的实验原理及方法。 二、实验原理 营养缺乏是盐胁迫下作物生长受到抑制的主要原因之一。氮素是植物的生命元素，蛋白质、核酸、辅酶、磷脂、叶绿素等化合物中都含有氮素。在盐胁迫下,作物氮素同化能力降低,造成氮素营养的相对缺乏[1]。盐胁迫下小麦幼苗的生长受到明显抑制,表现在鲜重、叶绿素和可溶性蛋白含量的降低。 盐胁迫对小麦的光合作用具有抑制效应，而且随外界盐浓度的提高，被抑制的程度也越大，通常在盐胁迫下, 盐胁迫下小麦叶片中叶绿素含量和类胡萝卜素总量下降。低盐胁迫下,外源施加适量的Ca2+ , 一方面可以缓解因Ca2+ 不足造成的矿质营养胁迫, 另一方面适量的Ca2+ 能够增强质膜的稳定性和钙信号系统的正常发生和传递, 阻止细胞内K+ 的外流和Ca2+的大量进入, 以维持细胞内离子平衡.[2]Ca2+明显促进了鲜重、叶绿素和可溶性蛋白含量的增加,表现出对盐胁迫一定的缓解效应,所以对小麦进行叶绿体色素含量的测定，可以分析出钙离子对小麦氯化钠胁迫培养的缓解作用。 叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm、645nm，叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数分别为82.4和9.27，叶绿素a和绿素b在645nm下的比吸收系数分别为16.75和45.60，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a、叶绿素b的浓度。 Ca=12.21A663-2.81A645　　 （1） Cb=20.13A645-5.03A663　　 （2） CT=Ca+Cb=8.05A663+20.29A645 （3） Ca——叶绿素a的浓度（单位为mg/L） Cb——叶绿素b浓度（单位为mg/L） CT——叶绿素的总浓度（单位为mg/L） 三、实验器料 1、材料:小麦种子、培养皿、纱布 2、试剂： 10%次氯酸钠溶液、80%丙酮或96%乙醇；石英砂；CaCO3；1.2%NaCl 溶液[3]；4.0g / L Ca( NO3 )2溶液[4] 3、仪器：分光光度计、高速离心机 四、实验步骤 1、小麦种子的培养 (1)挑选大小一致、饱满的小麦种子用10%次氯酸钠消毒10 min, 250C 浸种4 h, 然后置于铺有一层滤纸的培养皿内, 每皿30 粒, 试验采用两个组，一个实验组，一个空白对照组；分别 （2）培养5天，分别取小麦叶片测定其叶绿素含量（测定方法同步骤2）； （3）此后在实验组中加1.2%NaCl溶液培养，对照组中不变。每天都观察小麦成长情况，并做好记录。 （4）培养5天后，取实验组小麦叶片测定其叶绿素含量（测定方法同步骤2）； （5）继续在实验组中加4.0g/L Ca( NO3 )2溶液培养5天，测定其叶绿素含量（测定方法同步骤2）（叶绿素含量测定采用前后对照方法），培养期间观察实验组与对照组小麦的生长情况，并做好记录。 向小麦种子中所加的培养液情况表 组别 培养液 0-5天 6-10天 11-14天 实验组 自来水 1.2%NaCl溶液 4.0g/L Ca( NO3 )2溶液 对照组 自来水 2、小麦叶绿体色素的测定 （1）、提取叶绿素 选取实验组培养的小麦叶片，分别称取0.2g（两份）剪碎后置于研钵中，加入5ml 80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80%丙酮定容至25ml。 （2）、测定OD值 取各上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙酮作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿素提取液在645nm、663nm 下的吸光度。 （3）、计算： 把测出的吸光值带入(1)(2)(3)式计算叶绿素a、b、a+b的浓度。根据下式求出小麦叶绿素的含量： 叶绿素的含量（mg/g)=（c×v×n）/m C—叶绿素的浓度（mg/L)； v—提取液体积(ml)； n—稀释倍数； m—样品鲜重（g) 五、实验数据记录及分析 实验次数 组号 质量（g