核酸实验.pptVIP

核酸大实验;实验1 动物肝细胞内DNA和RNA 的提取和分离;;;;;;;试 管;;;;试 管;2、DNA样品的测定 取两份待测样品各2mL，各加入二苯胺溶液4mL，摇匀， 100℃恒温水浴中保温15min (严格控制时间） ，水浴冷却5分钟（不要骤冷） ，然后在595nm波长处测定光密度值。每次测量后拿出比色皿放入重新测量，每支测三次取平均值。根据测得的光密度值，从标准曲线上得到相应的DNA的mg数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 标曲比例系数：13.26 匀浆DNA含量=比例系数*待测液吸光度 /肝质量 （mg/g） ;注意事项 1、戊糖或含戊糖的物质对本法有干扰；某些己糖也对本法有干扰（糖经浓无机酸脱水产生糠醛或糠醛衍生物，在浓无机酸作用下，与苯酚生成缩合物）；去除方法为，低浓度乙醇沉淀法和醋酸钾沉淀法，提高缓冲液中NaCl浓度也可。 2、样品中蛋白质含量高时,应先用5%三氯乙酸溶液(TCA)沉淀蛋白质后再测定。; 3、 微量DNA无影响,较多DNA存在时,有干扰作用,如在试剂中加入适量CuCl2·2H2O可减少DNA的干扰,甚至某些已糖在持续加热后生成的羟甲基糖醛也能与地衣酚反应,产生显色复合物.此外,利用RNA和DNA显色复合物的最大吸收不同,且在不同时间显示最大色度加以区分,反应2min后,DNA在600nm显示最大吸收,而RNA在反应15min后,在670nm下呈现最大吸收. 4、地衣酚-三氯化铁试剂需临用时配制，由于试剂中有浓盐酸，反应时需加盖保鲜膜，防止盐酸挥发。 ;溶液配制：;二苯胺试剂：A液使用前称取2g结晶二苯胺，溶于200mL分析纯冰醋酸中，加5.5ml 浓硫酸棕色瓶保存。 B液2mL 1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱，一周内可使用）临用前加入，可提前配制50ml存于冰箱 地衣酚试剂：取0.1gFeCl3·6H2O溶于100mL浓HCl配制成0.1%三氯化铁浓盐酸溶液，为地衣酚贮存液。使用前再用上述溶液为溶剂加入0.1g地衣酚配成0.1%的地衣酚溶液。（临用时配制）