沃氏葡萄球菌分离和鉴定.docVIP

牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定 摘 要：采用金黄色葡萄球菌检测方法从牙膏中分离出一种葡萄球菌，应用VITEK 2全自动微生物分析系统鉴定为沃氏葡萄球菌，通过对其形态和生化特性进行鉴定，以期为今后沃氏葡萄球菌的深入研究提供参考依据。 关键词：葡萄球菌；分离；鉴定；生化鉴定 葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[ 3-4 ]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料 检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。 1.2 仪器和设备 所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。 1.2 方法 检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。操作步骤为： 1.2.1 样品的制备 称取10g样品，加到装有玻璃珠及90ml灭菌生理盐水的三角烧瓶中，充分振荡均匀，静置15min。用其上清液作为1：10的检液。 1.2.2 增菌 取1：10稀释的样品接种到90ml SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2 1.2.3 分离 从增菌液中取1-2接种环，划线接种在Baird Parker氏培养基，置36 1.2.4 纯化 挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1 1.2.5 2 结果与分析 2.1 菌落观察 菌落在Baird Parker培养基上呈圆形、光滑、较湿润，颜色为灰黑色，周围有晕圈；在血琼脂平板上菌落为圆形，灰白色，表面光滑，有少量溶血。 2.2 革兰氏染色镜检 将可疑菌落进行革兰氏染色，染色镜检为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜。 2.3 甘露醇发酵试验 将菌落接种于甘露醇发酵培养基中，36℃±1℃培养24h±2h，结果显示不能发酵甘露醇产酸。 2.4 血浆凝固酶试验 血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。 2.5 VITEK 2生化鉴定 将血平板上少量溶血菌落划线接种于营养琼脂，挑取菌落制成菌悬液，用GP鉴定卡通过VITEK 2全自动微生物鉴定系统进行鉴定。生化编码为000004010060271，判定为沃氏葡萄球菌（可能性为94%），具体生化结果见表1。 表1 沃氏葡萄球菌VITEK 2鉴定结果 生化名称 结果 生化名称 结果 AMY 苦杏仁苷 - URE 尿素酶 + PIPLC 磷脂酰磷脂酶C + POLYB 多粘菌素B耐受性 dXYL D-木糖 - dGAL D-半乳糖 - ADH1 精氨酸双水解酶1 - dRIB D-核酸 - BGAL β-D-半乳糖苷酶 - ILATK L-乳糖盐产碱 - AGLU α-葡萄糖苷酶 - LAC 乳糖 - APPA 丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶 - NAG N-乙酰-D-氨基葡萄糖 - CDEX 环式糊精 - dMAL D-麦芽糖 - AspA L-天冬氨酸芳胺酶 - BACI 杆菌肽耐受 - BGAR β-半乳糖吡喃糖苷酶 - NOVO 新生霉素耐受 - AMAN α-甘露糖苷酶 - NC6.5 6.5%NaCl生长 + PHOS 磷酸酶 - dMAN D-甘露醇 + LeuA 亮氨酸芳胺酶 - dMNE D-甘露糖 - ProA L-脯氨酸芳胺酶 - MBdG 甲基-B-D葡萄糖吡喃苷 - BGURr β-葡萄糖醛酸酶 + PUL 支链淀粉 - AGAL α-半乳糖苷酶 - dRAF D-棉子糖 - PyrA 焦谷氨酸芳胺酶 - O129R O/129耐受 + BGUR β-D-葡萄糖醛酸酶 - SAL 水杨素 - AlaA 丙氨酸芳胺酶 - SAC 蔗糖 + TyrA 酪氨酸芳胺酶 - dTRE D-海藻糖 + dSOR D-山梨酸 - ADH2s 精氨酸双水解酶2 + OPTO 奥普托欣耐受 + 3 讨论 葡萄球菌属主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是医院感染中的重要病原菌。在牙膏卫生指标中，金黄色葡萄球菌是必检项目之一，对沃氏葡萄球菌还没有相应的检测要求。沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，且其治病机制可能与该菌分解唾液和龈沟液中的尿素产生氨，