细菌培养接种、常用生化反应和细菌生长方式.doc

实验报告 课程名称： 医学微生物学 指导老师：________________成绩：__________________ 实验名称： 细菌培养接种、常用生化反应及细菌生长方式 实验类型：_____同组学生姓名：_____ 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得 装 订 线实验目的 装 订 线 了解细菌常用培养基 掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法 熟悉细菌各种生长现象 熟悉细菌常用生化反应 实验材料生理盐水、大肠杆菌液、白色葡萄球菌液、痢疾杆菌液，接种环、酒精灯以及多种培养基。 操作方法 细菌接种法 分离培养法——平板划线法（葡萄球菌/大肠埃希菌） 纯种培养法 斜面培养基接种法（葡萄球菌/大肠埃希菌） HYPERLINK /Article_Show.asp?ArticleID=2047 \t _top 用左手握住菌种管和斜面培养基管，右手持接种环或接种针。 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。 用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。 接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。 半固体培养基接种法 --- 穿刺接种法（大肠埃希菌/痢疾杆菌） 用左手握住菌种管和半固体培养管，右手持接种针 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。 用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。 塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于37℃培养18—24h，观察生长情况。 液体培养基接种法 （葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌） 用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。 示教 细菌的生长现象 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 常用生化反应 乳糖发酵试验 Indol试验 硫化氢试验 尿素分解试验 四、实验结果 细菌接种试验 如左图所示在ⅠⅡⅢ区细菌分布比较集中，在Ⅳ 如左图所示在ⅠⅡⅢ区细菌分布比较集中，在Ⅳ区占布了二分之一的培养基中，肉眼可见大量的单个菌落以供挑选纯种用。 对大肠杆菌的分离 细菌的生长现象 大肠杆菌（固体培养基）圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润 痢疾杆菌（半固体培养基）沿穿刺线生长 白色葡萄球菌（液体培养基）成白色，葡萄串状 常用生化反应 乳糖发酵试验 大肠杆菌⊕， Indol试验 大肠杆菌＋，肖氏沙门菌- 硫化氢试验 大肠杆菌 -，变形杆菌 + 尿素分解试验 痢疾杆菌 -，变形杆菌 + 五、结果分析 1.大肠杆菌的分离使单菌落出现。通过划布使单个细菌被分离出来。 2.细菌生长中大肠杆菌：具鞭毛，无芽孢；痢疾杆菌：无芽胞，无荚膜，无鞭毛,兼性厌氧；白色葡萄球菌既表皮葡萄球菌，无鞭毛，无芽孢，无荚膜。 3.生化反应： 糖发酵试验原理：不同细菌具有不同的糖分解酶，故分解各种糖后的产物也不相同，有的产酸，有的尚有气体形成，借此可鉴别各种细菌。乳糖发酵试验在肠道病原菌的鉴定中尤其重要。接种细菌若具有分解乳糖的酶，分解产酸就会使指示剂变色。如指示剂为酸性复红则变为红色；若有气体形成，则小倒管内有气泡集聚。 吲哚 (Indol) 试验原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚无色不能直接察见，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂(吲哚试剂)，作用后能形成红色的玫瑰吲哚，则被肉眼所识别。 硫化氢试验原理：某些细菌能分解培养基中胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢。硫化氢遇铁(如硫酸亚铁)或铅离子，则形成黑褐色的硫化亚铁(或硫化铅)沉淀物，黑色沉淀物愈多，表示生成的硫化氢量愈多，硫化氢试验用的培养基中含有硫代硫酸钠，它是一种还原剂，能保持还原环境，使形成的硫化氢不再被氧化。 尿素分解试验原理：有的细菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培养基pH值上升而变成碱性，使酚红指示剂呈现红色，是为阳性反应。 六、讨论心得 培养基配成后，灭菌要充分，单个或少数细菌（或其他微生物的细胞、孢子）接种到固体培养基表面，如果条件适宜，就会形成以母细胞为中心的体形较大的子细胞群体。这种由单个或少量细胞在固体培养基表面繁殖形成的、肉眼可见的子细胞群体称为菌落。 菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的。这些特