大学毕业论文综述分子标记在水产动物遗传育种研究中的应用.doc

分子标记在水产动物遗传育种研究中的应用 xxx (生命科学与技术学院 生物技术x级x班) 摘要：分子标记是以个体间遗传物质内序列变异为基础的遗传标记，是水平遗传多态性的直接的反映。与相比，随着分子生物学技术的发展，现在DNA分子标记技术已有数十种，广泛应用于遗传育种、基因组作图、、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、。DNA分子标记技术是根据基因组DNA存在丰富的多态性而发展起来的可直接反映生物个体在DNA水平上的差异的一类新型的遗传标记技术。它是继形态学标记、细胞学标记、生化标记之后最为可靠的遗传标记技术，并且取得了快速的发展。DNA分子标记的应用使得人们对水产养殖动物的遗传多样性、近亲繁殖、种类和品系鉴定以及遗传连锁图谱建立的研究都取得了很大进展。如今DNA分子标记主要包括：线粒体DNA(mito—chondrial DNA。mtDNA)、限制性片段长度多态(restriction fragment length polymorphism，RFLP)、随机扩增多态性DNA (random amplified polymer phicDNA，RAPD)、扩增片段长度多态性(amplifted fragment length polymorphism，AFLP)、小卫星DNA(minisatellite DNA)、微卫星(microsatellite DNA)又称简单序列重复(simple sequence repeat，SSR)、单核苷酸多态性(single nucleotide polymerphism，SNP)、表达序列标签(expressed Sequence tags，ESTs)等标记技术。本文将对这些技术在水产动物遗传育种方面的应用做简单的介绍。 1 RAPD标记 RAPD标记的原理 RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)是指随机扩增的多态性DNA。利用一系列随机排列的寡聚核苷酸为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增。模板DNA经90～94℃变性解链后在较低温度( 36～370C)下退火，这时形成的单链模板会有许多位点与引物互补配对。在72℃下，通过链延伸，形成双链结构，完成DNA合成。如果所用引物与基因组结合位点发生DNA片段的插入、缺失或碱基突变，就会使PCR产物增加、缺失或发生分子量的改变，从而产生片段大小不等的扩增产物，通过电泳分离和染色便可得到许多不同的条带，从中筛选出特征性谱带，扩增产物的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性，物种基因组组成在RAPD图谱上也得到了体现[1-3]。 RAPD标记在水产动物遗传育种中的应用 RAPD分析可以在DNA水平上提供大量的遗传标记，鉴定快速准确。利用RAPD分子标记技术筛选水产动物种间鉴别标记，为水产动物的分子标记辅助选育、种质资源保护和遗传性状选育提供技术支撑。杨弘等[4]利用RAPD技术对日本鳗(Anguilla japonicus)、欧洲鳗(A. anguilla)和美洲鳗(A. rostrata)的DNA进行扩增，共扩增出37个特异性标记，可用来区分这3种鳗鱼。佟雪红等[5]利用RAPD技术对建鲤、黄河鲤及其正反杂交子代共4个群体RAPD扩增图谱的比较，寻找两亲本的RAPD特征标记，探讨子代杂种优势产生的分子生物学机理，为下阶段良种培育提供遗传学依据。司伟等[6]运用RAPD技术对建鲤人工诱导雌核发育的子一代进行分析，区分雌核发育鱼与杂交鱼，以建立雌核发育鱼的分子鉴别技术。梁利群,孙效文等[7]对黑龙江野鲤,荷包红鲤进行抗寒性状的RAPD分析,结果发现黑龙江野鲤把遗传物质传给了荷包红鲤抗寒品系,控制抗寒性状的基因应该在扩增得到的特意带型中或与之相关。因此,深入研究这些特异性DNA带型,进一步建立抗寒性状与RAPD图谱间的连锁关系,渴望克隆出与鱼类耐寒性状相关的主基因,并把这种基因应用于一些不耐寒鱼类的改良研究。从2O世纪9O年代开始，美国就用RAPD等技术对斑节对虾、南美白对虾的遗传多样性和群体遗传结构进行了调查评估，指导了高健康虾的选育工作，培育出了高健康虾和无特异病原虾品系。宋林生等 [8]采用RAPD技术对我国栉孔扇贝野生种群和养殖群体的遗传结构及其分化进行了研究，发现我国栉孔扇贝野生种群的多态性位点比例和杂合度处于较高水平，说明我国栉孔扇贝野生种群的遗传多样性水平较高，种质资源尚处于较好状态。 2 AFLP标记 2.1 AFLP标记的原理 AFLP是建立在RFLP基础上的选择性聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)，AFLP的基本原理是基因组DNA经限制性内切酶双酶切后，形成分子量大小不等的随机限制性片段，将特定的双链接头(Adaptor)连接在这些DNA片段的两端，形