高效液相色谱仪使用总常见的问题和解决的方法.docVIP

高效液相色谱(High Performance Liquid Chro—matographv．HPLC)是近3O年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离、分析技术。 它既能用于微量组分的分析测定．又能用于大量的制备分离．灵活多样，应用范嗣已超过其它各种分离方法．高效液相色谱仪在使用过程中常会出现一些影响分析结果的问题． 如果使用人员了解常见问题及其成因和相关解决方法．就能做到勤维护早预防．使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(见图1)。对于整个系统而言．柱子、泵和检测器是核心部件．同时也是易出问题的主要部位。 2 常见问题及解决方法高效液相色谱仪作为一种高精密仪器．如果在使用过程中操作不当的话．就容易导致一些问题．其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰形异常问题。2．1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关 所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值．而是指压力波动范围在345kPa以内(在使用梯度洗脱时。柱压平稳、缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。2．1．1 压力过高这是高效液相色谱仪在使用中最常见的问题．指的是压力突然升高．一般都是由于流路中有堵塞的情况。此时．我们应该分段进行检查。 首先断开真空泵的人口处．此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶．看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下．则是溶剂过滤头堵塞处理方法：用3O％ 的硝酸浸泡0．5h．在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下．溶剂过滤头正常，再检查。 打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤头堵塞。处理方法：将过滤头取出．用1O％ 的异丙醇超声30min 如果压力降至690kPa以下．过滤头正常．再检查。把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95％ 的水冲至压力正常：如果是一些强保留的物质导致堵塞．则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常 假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降．则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上．用流动相冲洗柱子 这时．如果柱压仍不下降，只有换柱子人口筛板。但一旦操作不慎．很容易造成柱效下降．所以尽量少用2．1．2 压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏．处理方法：寻找各个接口处．特别是色谱柱两端的接口．把泄漏的地方旋紧即可 当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低．更严重一点会导致泵无法吸进液体。处理方法：打开Purge阀．用3～5ml／min的流速冲洗．如果不行．则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出2．2 漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移2．2．1 基线漂移一般说来．机器刚启动时．基线容易漂移．大概要30min的平衡时间， 如果用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果在实验过程中发现基线漂移，则要考虑下面的原因(见表1)。表1 基线漂移的原因及解决方法? ?原因 ?解决方法 ?柱温波动 ?控制好柱子和流动项的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱 ?流通池被污染或有气体 ?用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子），如需要，可用1mol/l的硝酸（不要用盐酸）冲洗 ?紫外灯能量不足 ?更换新的紫外灯 ?流动相污染、变质或有低品质溶剂配成 ?检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 ?样品中有强保留的物质（高K值）以馒头?峰样被洗脱，从而表现出一个逐步升高的基线 使用保护柱，如有必要，在进样之前；在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子 ?检测器没有设定在最大吸收波长处 将波长调整至最大吸收波长 ?流动相的PH值没有调节好 ?加适量的酸或碱调至最佳PH值 2．2．2 保留时间漂移保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西．两次的保留时间相差不要超过15s，超过了30s可看做保留时间漂移，就无法进行定性，要考虑以下原因(见表2)。2-3 峰形异常问题表2 保留时间漂移的原因及解决方法 ?原因 ?解决方法 ?温控不当 ?调好柱温．检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱 ?流动相比例变化 ?检查四元泵的比例阀是否有故障 ?色谱柱没有平衡 ?在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱 ?流速变化 ?重新设定流速 ?泵中有气泡 ?从泵中除去气泡 峰形问题是液相的主要问题．在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰形，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题