虾青素分析测定方法的研究.doc

虾青素分析测定方法的研究 科学技术与应用 罗玉芳 约3713字 【摘 要】选择分光光度法及高效液相色谱法对测定虾青素的分析条件进行研究从而得出最佳的测定条件。用分光光度法和高效液相色谱法测定虾青素标准曲线的回归方程的R2都超过了0.99。用分光光度法测定虾青素回收率范围为99.3-101相对标准偏差RSD值为0.78-1.3用液相色谱法测定虾青素回收率范围为100-102 相对标准偏差RSD为0.62-1.4。这些值都在定量分析所要求的阈值范围内可以用于定量分析。 【关键词】分光光度法高效液相色谱法虾青素 Abstract Choice two based on the spectrophotometry and high performance liquid chromatography HPLC were developed for determination the astaxanthin. And the optimum conditions was investigated in detail. The total amount of astaxanthin was measured by spectrophotometry the recoveries were in the range of 99.3-101 and RSD were in the range of 0.78 -1.3 . Also the astaxanthin was determined by HPLC and the recoveries were in the range of 100 -102 RSD were in the range of 0.62-1.4. All these values were within the range of permissive threshold value on quantitative analysis which showed that it’s feasible for measuring the content of astaxanthin by these two methods. Key words: spectrophotometryHPLCastaxanthin 从动植物及菌类中提取虾青素目前还处于实验研究的基础阶段要实现产业化生产虾青素还必须对其提取工艺进行广泛深入的研究。要开展这方面的研究必须建立起快速、高效、简便的虾青素分析方法。虾青素是一种类胡萝卜素1分光光度法和高效液相色谱法是常用的两种类胡萝卜素分析方法23这两种方法各有特点类胡萝卜素分子因其分子结构中的共轭双键体系及离域化的π电子在可见光区表现出强吸收带且每种类胡萝卜素分子的最大吸收峰位置与紫外可见光光谱的精细结构都是具有特征性的。由于类胡萝卜素分子的这种光吸收性质溶液中的类胡萝卜素一般服从Beer-Lambert定律所以通过分光光度法可实现对其精确的定量分析4高效液相色谱法具有分离速度快在线检测如UV 检测器灵敏度高等优点是美国NFIA美国饲料协会规定的测定方法。本工作旨在通过对分光光度法和液相色谱法测定虾青素的研究从而建立快速、有效、准确的测定虾壳中虾青素的方法。 一、材料和方法 一材料 1仪器721型分光光度计上海精科食品厂 高效液相色谱仪日本岛津公司 18 色谱柱250 mm×4.6 mm迪马公司 恒温箱 202-1 型上海市上海县试验仪器厂 JA2003 上皿电子天平上海天平仪器厂 2试剂虾青素标准品分析纯美国sigma公司乙腈色谱纯甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚等均为分析纯。 二实验方法 1分光光度法 准确称取一定量的虾青素纯样品多份分别用乙醇有机溶剂溶解后各自配制成1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、5.0μg/mL、6.0μg/mL的标准溶液用721型分光光度计测定不同波长下的吸光度。在最大波长下以试剂空白调零测其吸光度。 以虾青素标准溶液的浓度为横坐标对应的吸光值为纵坐标绘制标准曲线。 2高效液相色谱法 1. 色谱工作条件 色谱柱C18250mm×4.6mm。流动相乙醇甲醇二氯甲烷751510V/V流速为1.0mL/min。柱温室温。检测波长为480nm进样量20μL。 2. 标准工作曲线绘制 称取一定量的虾青素标准溶液用甲醇配制浓度分别为1.0 μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0 μg/mL标准溶液分别取20μL进样根据峰面积与相应的浓度进行线性回归绘制标准工作曲线。 二、结果与分析 一分光光度法分析虾青素 1虾青素标准样品在乙醇溶剂中的最大吸收波长 我们将虾青素标准样品溶解在乙醇溶剂