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吉林大学生物基础实验教学中心 微球的制备 吉林大学 国家级生物基础实验教学示范中心 1、目的要求 2、实验原理 3、试剂与器材 4、实验步骤 5、注意事项 6、思考题 目的要求 1.掌握O/W法制备微球的工艺。 2.掌握微球粒径的检测方法。 实验原理 自从19世纪30年代微胶囊化技术诞生以来，其在药物传递方面的应用得到了越来越多的关注。为了达到更好的效果，应用最广泛的微胶囊化技术-微球传递系统必须满足一些原则 （i）具有高的包封率，（ii）在包封及储存过程中药物活性能得到很好的保护，（iii）能够容易的到达靶向位点，(iv)能够控制释放速率，减小药物所带来的副作用。通过微球体给药的好处不仅能够保护包封药物免受体内环境的影响，而且能够控制药物释放，服药频率降低能够使病人感到更加舒适，改善顺应性。 到目前为止，已有各式各样的材料应用到微球当中，由于生物不可降解材料最终需要采用外科手术移除，所以现在研究的热点为生物可降解材料。通过使用天然的聚合物，如天然存在的乳酸和羟基乙酸制得的藻酸盐，壳聚糖，胶原质或者合成的聚合物，可生产出具有生物可降解和生物相容性的微球。使用天然的高分子材料必须慎重，因为它们可能被内毒素或具有免疫原性的蛋白所污染。 19世纪70年代，生物可降解能力好，生物相容性强的聚乳酸（PLA）问世，目前，以他为基础的共聚物羟基乙酸（PLGA）已经成为最受欢迎的聚合物材料，PLGA具有众多优点，如：不宜被污染，可以根据分子质量控制其释放速率，还可以根据需要修饰乳酸/羟乙酸的比例。 冷冻干燥技术 将含有大量水分的物料预先进行降温，冻结成冰点以下的固体.在真空条件下使冰直接升华，以水蒸气形式除去，得到干燥产品的一种技术（升华干燥） * * water phase diagram 技术原理 * * 冷冻干燥过程曲线 * * 技术装备 * * 冷冻干燥机 。 试剂与器材 试剂： 羟基聚乳酸共聚物（PLGA）或聚乳酸（PLA），利培酮（Ris），聚乙烯醇（PVA），二氯甲烷 器材： 磁力搅拌器，光学显微镜，5ml注射器，10mlEP管，载玻片，盖玻片，100ml烧杯 实验步骤 1.处方 油相：利培酮 200mg PLGA （或PLA） 300mg 二氯甲烷 5ml 水相： PVA 375mg 去离子水 75ml 2.操作 (1)油相的配制：取处方量的利培酮，PLGA置于10mlEP管中，加入5ml的二氯甲烷溶解，即得。 (2)利培酮微球的制备：取PVA约30ml于50ml烧杯中，置磁力搅拌器上搅拌溶解（如室温过低需要加热加快溶解），待PVA完全溶解后，用5ml注射器吸取油相，匀速将油相注入水相中（要求注入部位尽量接近搅拌桨，注入时间不超过30s） ，注入后继续搅拌4小试，使二氯甲烷完全蒸发除去，取下磁力搅拌器，镜检，即得。 (3)利培酮微球的冻干 取利培酮微球置于冻干机中，按冻干曲线进行冻干。 3.质量检查与评定 微球的形态与粒度(冻干前) 取少量微球混悬液置于载玻片上，盖上盖玻片，用有刻度标尺（刻度已校正器每格的um数）的接目镜的显微镜观察微球表面形态，测量不同大小计数。 微球的粒度分布（冻干后） 取少量微球混悬液置于激光粒度分析仪中进行分析。 微球的含量测定： （冻干后） 精密称取微球样品约10mg，置于25ml容量瓶中，用2ml丙酮溶解，待完全溶解后，振摇下加入0.1mol/L HCl溶解，定容至25ml，过0.45μm微孔滤膜，用HPLC法测定。平行取样3份并同法测定。 思考题 O/W法制备微球成败的关键是什么？ * * * * -刘宇- 吉林大学生物基础实验教学中心 * *