课题难点植物组织培养过程中使用的无菌技术.ppt

课题目标 说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。 课题重点与难点 课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。 课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。 （一）植物组织培养的基本过程 知识要点： 1.细胞分化的概念； 2.离体植物细胞的脱分化和再分化。 （二）影响植物组织培养的因素 知识要点： 影响植物组织培养的因素有培养基配制、外植体的选取、消毒、接种、培养、移栽和栽培等。 我国用花药培养法先后培育出优质高产的经济作物、粮食和蔬菜等新品种，广泛应用于果树和花卉的快速繁殖。 借助于组织培养生产人工种子，解决某些作物品种繁殖力差、结子困难或发芽率低等问题。 生产药物、食品添加剂、香料、色素、和杀虫剂等。例如：紫杉醇，生物碱、紫草素等。 转基因植物的培育 植物去病毒 三、植物组织培养的基本过程 什么叫细胞分化、脱（去）分化、再分化？ 如何控制细胞的脱分化与去分化？ 四、影响植物组织培养的因素 结果分析与评价 （一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格 课题延伸（略） 练习 1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。 * 快速繁殖 一、植物组织培养技术有何意义？ 二、细胞的全能性 Ⅰ、所谓细胞全能性，是指细胞如受精卵一样，具有经过分裂、分化形成各种组织和细胞，最终发育成一个完整的个体的能力；细胞核全能性则指细胞虽不具备发育成一个完整个体的能力，但是当将其细胞核通过核移植等方法导入去核的卵细胞或受精卵，经过受体卵细胞质的诱导去分化、体细胞核和受体卵细胞质共同作用，依然可能发育成一个完整的个体。因此，细胞全能性和细胞核全能性是两个完全不同的概念，不能混为一谈。细胞核的全能性并不代表细胞具有全能性。 Ⅱ、植物体细胞具有全能性 低等动物的细胞和高等动物早期胚胎细胞具有发育全能性 高等动物的体细胞核具有发育全能性 高等动物的体细胞是否具有全能性？——一个还没有最后结论的话题 1、植物学家将胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放在特定的培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是( ) Ａ.彼此性状极为相似 Ｂ.都是单倍体植株 Ｃ.植株的变异频率较高 Ｄ.都是纯合体植株 2、根据分裂潜能，干细胞可分为全能干细胞（可发育成完整的个体）、多能干细胞（可发育成多种组织和器官）和专能干细胞（发育成专门的组织和器官），则这些细胞在个体发育中的分化顺序是( ) Ａ.全能——专能——多能 Ｂ.全能——多能——专能 Ｃ.多能——全能——专能 Ｄ.专能——全能——多能 练 习 1、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同 2、培养基的配制(MS培养基) 大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等 3、不同植物激素使用顺序和使用量 4、消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因： 5、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h 植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适合的营养。在这种培养基上，细菌等微小的生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此，植物组织培养要想取得成功，必须有效地防止细菌等的污染，保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要求，就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培 养 栽 培 四、实验操作 移 栽 冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上 此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养 在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能