重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.pdfVIP

第 39卷第 6期第 758页 华 中科技大学学报 (医学版) V0l_39 No．6 P．758 2010年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2010 重组质粒 pcDNA3．1-TK—IRES—BDNF的构建及其 在大鼠骨髓间充质干细胞 中的表达* 张斌青， 安 锐△， 吴 涛， 孙 逊 华 中科技大学 同济医学院附属协和医院核医学科 ，湖北省分子影像重点实验室，武汉 430022 摘要 ：目的 体外构建携带报告基 因胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和治疗基 因脑源性神经营养 因子(BDNF)的重组质粒 载体 pcDNA3．1一TK—IRES-BDNF，并检测其在大鼠骨髓 间充质干细胞 (BMSCs)中的表达。方法 采用密度梯度离心法 分离获得 BMSCs，进行细胞免疫化学鉴定；应用 PCR技术获得 HSV1一TK、内部核糖体进入位点 (IRES)、BDNF的cD— NA序列，酶切后依次插入到 pcDNA3．1的多克隆位点 (MSC)中，酶切和序列分析鉴定