PV-6000-D DAB染色液(聚合物法)说明书.pdfVIP

PV-6000-D DAB 染色液（聚合物法）说明书 【产品名称】 通用名称：DAB 染色液（聚合物法） 英文名称：DAB Detection Kit （Polymer） 商品名称：Polink-1 DAB 【包装规格】 180 人份/盒、550 人份/盒、1100 人份/盒 【预期用途】 本公司生产的 DAB 染色液（聚合物法），用于检测鼠源和兔源性一抗，对常规经福尔马林固定的石蜡切片、冷冻切片及 细胞涂片中的靶抗原进行染色，适用于在光学显微镜下观察。 【检验原理】 酶标记羊抗小鼠/兔IgG聚合物识别连接组织切片上的一抗；再加入DAB显色液，聚合物上的过氧化物酶可以催化DAB显 色液中的H O 分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，使组织切片中一抗结合的抗原位点出现棕黄色着色。 2 2 【主要组成成份】 编号 组份 规格 规格 规格 试剂 1 内源性过氧化物酶阻断剂 18ml/瓶×1 55 ml/瓶×1 110 ml/瓶×1 试剂2 酶标羊抗小鼠/兔IgG 聚合物 18 ml/瓶×1 55 ml/瓶×1 110 ml/瓶×1 试剂3A DAB 底物缓冲液 30 ml/瓶×1 100 ml/瓶×1 200ml/瓶×1 试剂3B DAB 浓缩显色液 1.5 ml/瓶×1 5 ml/瓶×1 10 ml/瓶×1 本产品未提供如下试剂和耗材：二甲苯、乙醇（无水、95%、85% ）、去离子水、中性树胶、一抗、阳性质控片、苏木 素、PBS溶液、修复液。 【储存条件及有效期】 2～8℃避光保存，不得冻存。产品有效期为12个月。 使用时采取单支试剂即拿即用的原则，其余组份在2~8℃的冰箱保存。单支试剂使用后，应立即放回冰箱中。 按说明书配制成的DAB显色液在2~8℃避光条件下保存，24小时内有效。 【样本要求】 新鲜活检或外科样本组织，中性福尔马林固定，固定时间8~24小时，参照《临床技术操作规范 病理学分册》要求取材、 脱水、石蜡包埋并制成蜡块。 组织切片厚度为3~5µm黏附在防脱处理的玻片上，56~60℃烤片两个小时后，冷却至室温。如果切片在室温下（18~28℃） 保存，为了良好地重现组织中抗原分布情况，要在2个月内完成染色。 【检验方法】 1、检验所需设备：移液器、恒温箱、修复仪、免疫组化笔、计时器、孵育盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶。 2、试剂准备：DAB 显色液需要在使用前配制。配制方法：在小试管中依次滴加DAB 底物缓冲液1ml，DAB 浓缩显色液 50µl，混匀。配置好的DAB 显色液避光2~8℃存放，24 小时内有效。 3、操作程序： a ）脱蜡和水化，二甲苯脱蜡，浸泡10 分钟×3 次；无水乙醇，浸泡1 分钟×3 次；95%乙醇，浸泡1 分钟；85%乙醇， 浸泡1 分钟；75%乙醇，浸泡1 分钟；去离子水，浸泡1 分钟×3 次。 b）抗原修复，参照一抗说明书进行。 c ）阻断内源性过氧化物酶，将抗原修复后切片置去离子水中，浸泡1 分钟×3 次；用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织 区域，PBS 溶液冲洗2 分钟×3 次。除去PBS 溶液，在圈定区域内加适量内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育10~15 分钟； 地址：北京市西城区广外南滨河路23 号立恒名苑2 号楼2302 室 邮编：100055 电话：01063474810400-810-9781 传真：010 网站：Http:// 邮箱：sales@ PBS 溶液冲洗2 分钟×3 次。 d ）滴加适量一抗，室温或37℃孵育60 分钟。PBS 溶液冲洗2 分钟×3 次。 e）滴加适量辣根酶标羊抗小鼠/兔IgG 聚合物，室温孵育15~20 分钟。PBS 溶液冲洗2 分钟×3 次。 f ）显色，滴加适量配置好的DAB 显色剂，室温5 分钟左右。 g ）复染，自来水冲洗，苏木精复染10~30 秒，1%盐酸分化，自来水冲洗返蓝。