- 1、本文档共25页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
X小体与PAS整理
人类X小体的检测
一.实验原理
1. X小体的本质:
哺乳动物体细胞核中,除一条X染色体外,其余的X染色体发生异固缩,功能上处于失活状态,将其称为X小体(X染色质,性染色质,巴氏小体 Barr body),通常位于间期细胞核的核膜边缘,染色深而致密
如:甲苯胺蓝人类正常的男女体细胞中,22对常染色体并无区别,但其性染色体分别为XY和XX。女性的两条X染色体中,有一条在间期呈现浓缩状态,可由适当的染料显示。正常女性口腔黏膜上皮细胞中X小体阳性率10-30%。
如:甲苯胺蓝
2.X小体的数目:X小体的数目= X染色体数目-1
正常女性细胞:2条X染色体,X小体的数目为1
正常男性细胞:1条X染色体,X小体的数目为0 。
有三个X染色体者X小体的数目为2
3. 莱昂假说(Lyon hypothesis )
(1)正常雌性哺乳动物体细胞中的两个X染色体之一在遗传性状表达上是失活的。
(2)X染色体的失活是随机但恒定的。失活的X染色体可来源于雌性亲本,也可来源于雄性亲本。
(3)失活现象发生在胚胎发育的早期,一旦出现则从这一细胞分裂增殖而成的体细胞克隆中失活的都是同一来源的染色体
4. 剂量补偿(dosage compensation effect)
女性有两条X染色体,但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。这种男女X连锁基因产物相等的现象在遗传学上称为剂量补偿。
5. X小体的应用
(1) 鉴定个体的性别
胎儿细胞性染色体检查:羊水细胞,绒毛细胞,用于预防性染色体遗传性疾病的发生,优生。
(2) 诊断性染色体异常综合征
克氏(Klinefelter’s)综合征,先天性睾丸发育不全综合征,患者为男性但有一 个巴氏小体,核型是47,XXY 。
特纳氏(Turner’s)综合征,先天性卵巢发育不全综合征,患者为女性但却无巴氏小体,核型是45,XO 。
超雌:XXX, XXXY有2个巴氏小体等。
二.实验材料
取材:女性口腔粘膜上皮细胞
试剂:0.85%生理盐水,低渗液0.075M KCl,Carnoy固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶l,现配), 5M 盐酸,0.2%甲苯胺兰染液
耗材:牙签、离心管、载玻片、染色缸
仪器:恒温水浴箱,离心机,光学显微镜
三.实验方法
0.075M KCl1.取材:吸取5ml生理盐水于离心管中,漱口后用牙签钝端从口腔两侧颊部刮取女性口腔粘膜上皮细胞4-5次,置入离心管的生理盐水中洗脱下来,轻轻摇匀,1000r/min离心10min,弃上清。
0.075M KCl
2.低渗:加入5ml预热的低渗液,轻轻混匀,37℃低渗10min。
甲醇∶冰乙酸=3∶l,现配(低渗液的作用:低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展
甲醇∶冰乙酸=3∶l,现配
3.固定:
终止KCl进一步低渗(1)加入新鲜配制的Carnoy固定液1ml,混匀,室温预固定2min,1000r/min离心8min,弃上清
终止KCl进一步低渗
(2)加入固定液5ml,吹打混匀,室温固定15min,1000r/min离心10min,弃上清。
(3)加入固定液0.5-1ml,混匀,制成细胞悬液。
(固定液的作用:固定液的重要特性是能迅速穿透细胞,使蛋白凝固,终止细胞代谢过程,并保持细胞核染色体结构的完整性,并且能够增强染色体的嗜碱性,达到优良的染色效果。)
4.滴片:吸取细胞悬液自10—20cm高垂直向下滴在一张预冷的载玻片上(2-3滴),标记,空气风干或烘干。
(目的:从高处向下滴片,让液体分散开:形成细胞单层,使染色体分散,便于
观察。用冰片:是降低液体的表面张力。)
课件上是细胞壁,我觉得应该是细胞膜5.水解:玻片放入盐酸缸中,室温水解10min后取出,自来水细水漂洗数秒钟,洗去多余盐酸,空气风干或烘干。
课件上是细胞壁,我觉得应该是细胞膜
(水解可除去细胞间的果胶质,使细胞壁软化或部分分解,从而使细胞和染色体易于分散,同时可去除杂质。)
6.染色:玻片放入甲苯胺兰染液缸中,染色3min后取出,自来水细水漂洗数秒钟,空气风干或烘干。
(甲苯胺兰是一种碱性染料,与细胞核蛋白(酸性)结合,染成紫蓝)
7.镜检:低倍镜→高倍镜。
四.注意事项
1.取材前需用水漱口数次,尽可能除去细菌和食物残渣;用洁净的牙签钝端从口腔两侧颊部刮取粘膜,为防止后面的离心损耗,应尽量多取一些。
2.弃上清时,用吸管吸取上清,弃去,接近下方沉淀时,应小心吸取。
3.加入低渗液后,轻轻混匀,不能太用力,以防核膜破裂。
4.固定液使用前需临时配制,长时间放置影响固定效果。
5.载玻片于临用前在-20度冰箱中取出,现用现取,以防温度上升。
6.加热时应距离
您可能关注的文档
- 2014年九年级物理中考复习联考模拟试卷和答案【河南南阳宛城区】.doc
- 2014年二级建造师《水利水电工程管理和实务》真题题库.doc
- 2014年内分泌科高级职称考点之内分泌系统结构和特点点评.doc
- 2014年吉林省公务员面试热点 保障房制度“篱笆”.doc
- 2014年四川事业单位考试行测类比推理中造字法解析.doc
- 2014届高三生物理综教学案045 酶应用.doc
- 2014年天津市会计从业资格考试《财经法规和会计职业道德》最新预测试卷_2.doc
- 2014年尿素厂科技创新一季度总结和二季度计划.doc
- 2014年枣树管理技术和用药方法.doc
- 2014年江苏省学业水平测试历史真题和答案WORD版.doc
- 数据仓库:Redshift:Redshift与BI工具集成.docx
- 数据仓库:Redshift:数据仓库原理与设计.docx
- 数据仓库:Snowflake:数据仓库成本控制与Snowflake定价策略.docx
- 大数据基础:大数据概述:大数据处理框架MapReduce.docx
- 实时计算:GoogleDataflow服务架构解析.docx
- 分布式存储系统:HDFS与MapReduce集成教程.docx
- 实时计算:Azure Stream Analytics:数据流窗口与聚合操作.docx
- 实时计算:Kafka Streams:Kafka Streams架构与原理.docx
- 实时计算:Kafka Streams:Kafka Streams连接器开发与使用.docx
- 数据仓库:BigQuery:BigQuery数据分区与索引优化.docx
文档评论(0)