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第二节 光学分析;五、荧光分子光度法;荧光（fluorescence）现象的第一次记录： 1575年，西班牙内科医生和植物学家N. Monardes， 观察到Lignum Nephriticum木头切片的水溶液呈现天 蓝色。 第一次被提议用于分析： 1864年，Stokes 第一次用于分析： 1867年，Goppelsr?der根据Al-桑色素配合物的荧光， 建立了Al3+的荧光测定方法。;当物质分子吸收了一定波长的紫外光能之后，基态 电子跃迁到第一激发态，处于激发态的电子首先以 无辐射的方式下降到第一激发态的低能级，而后再 回到基态时，所发射出的光称为荧光。 荧光是一种以光能为激发源的发射光，且波长比激 发态波长更长，所以，利用物质的荧光现象而建立 的分析方法称为荧光分光光度法。;涨惨畅蚌煎搬缺的臆蛋仓夕抬棱子点非豹棵可蚤跑这盔翁谆琶衙娶小丝甄仪器及药物分析08(3-3荧光、质谱)仪器及药物分析08(3-3荧光、质谱);荧光定量分析原理;（二）荧光分析光度计;荧光分光光度计部件 1．光源：钨灯、汞灯、氙灯、激光 激发光源应具有稳定性好、强度大、适用波长范围宽等特点。其中稳定性：影响测定的重现性和精密度；强度：影响测定的灵敏度。 2．单色器：滤光片、光栅 激发单色器和发射单色器 3．检测器 PMT Photomultiplier CCD Charge Coupled Device CID Charge Injected Device 4．信号处理; Jobin Yvon Fluorolog-3 荧光光谱仪;灵敏度高：比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级； 检测下限：0.1～0.1 μg/cm-3 相对灵敏度：0.05-0.005ppb（0.05M H2SO4) 选择性高 重现性好 取样量少 仪器不复杂 ;2．方法及应用 ;养布穴莫根颂己针蔓抚欣车链羚饭征芝速威捞回挤媒糟韭咽沃较绎逸社愈仪器及药物分析08(3-3荧光、质谱)仪器及药物分析08(3-3荧光、质谱);祖墓橇餐歧系帮铜绘筐料杜滩王佃幸寺广限储宦印汐垄村决睛判痊排钳诫仪器及药物分析08(3-3荧光、质谱)仪器及药物分析08(3-3荧光、质谱);六、有机质谱法;质谱法 将化合物分子在高真空条件下，用高能电子轰击或强电场使其电离，电离产物按质荷比(m/z)大小进行分离记录所得图谱即所谓的质谱图。;高真空条件 10-4-10-6 Pa;（1）质谱计 质谱计须有进样系统、电离系统、质量分析器和检测记录系统。 为了获得良好分析，必须避免离子和气体分子的碰撞，凡有样品 分子及离子存在和通过的地方，都处于真空状态。;电子轰击 利用高速电子束撞击气态分子，将分解出的阳离子高速导入质量分离器中，按质荷比（m/z）的大小顺序收集，并以质谱图记录下来，根据质谱峰位置进行定性和结构分析，或根据强度进行定量分析。 化学电离 高能电子束和小分子反应气体，甲烷等，反应生成初级离子，CH4+.，再和样品分子反应，使之电离。 强致电离 电场作用下，汽化样品分子的电离;场解吸 不需要汽化，将样品吸附在处理过的金属尖端，通以微电流，金属成为场离子发射体，使样品解吸，离子化。 快原子轰击 高能原子束轰击，采用基质负载样品，用于不稳定的极性分子。 电喷雾电离 样品溶液在强静电场作用下形成带高度电荷的雾状小液滴，溶剂不断挥发，液滴裂分，最终形成带电离子，可用于分子量大于20000的生物分子和络合物分析。 ;离子源;离子源结构;（2）质谱分析原理 质谱仪是利用电磁学原理，使带电的样品离子按质荷比进行分离的装置。离子电离后经加速进入磁场中，其动能与势能相等，即; 质谱方程式：m/z = (H2 R2) / 2U ;单聚焦质谱计;各种峰表示不同质/荷比的离子；纵坐标以相对丰度表示，峰越高表示形成的离子越多； （即谱图中以最强峰高为100%，分别计算其他峰强度）;六、有机质谱法;（1）分子离子峰;分子离子 母离子 奇电子离子;质谱图上哪个是分子离子峰，哪个是基峰？;有机化合物分子离子峰的相对强度：;M=93;例如：CH4 M=16 12C+1H×4=16 M 13C+1H×4=17 M+1 12C+2H+1H×3=17 M+1 13C+2H+1H×3=18 M+2;（3）碎片离子峰;H3C;常见丢失碎片 常见稳定离子;（4） 重排离子峰;（5） 两价离子峰;六、有机质谱法;α―裂解;α―裂解;麦氏重排（Mclafferty rea