鉴别植物细胞质类型的方法及其优缺点.docVIP

1.鉴别植物细胞质类型的方法及其优缺点。 油菜品种(系)的细胞质，可分为可育胞质(N)和不育胞质(s)两大类。正确鉴定各种品种(系)的细胞质类别．是重要的基础工作，对选育油菜三系有十分重要意义。如果明确某品种S胞质．那么．以它作母本，分别与其他许多品种作父本杂交，其后代就可能出现雄性不育。 目前，油菜细胞质类型主要通过普通遗传学方法、线粒体基因组DNA的限制性酶切片段长度多态性（即mtDNA-RFLP）标记2种进行鉴定。 鉴定品种细胞质类别的普通遗传学方法，是用待制细胞质类别的品种(系)作母本，用已有的保持系[N(rfrf)]或不育系[S(rfrf)]的微量花粉作父本做人工去雄杂交．FI代一般可育，播种F1代自交产生的F2代种子，开花时鉴定F2代植株的育性表现。如F2代群体育性无分离(即全部为可育)，则证明披测定的品种(系)具有正常可育(N)胞质；相反，如F2代群体有育性分离(出现不育株)、则证明被测定品种(系)具有不育(s)胞质。其遗传原理如下： 待测定未知细胞质类别的5种(系)可能基因型有S(RfRf)、N(RfRf)、N(rfrf)等类。如待测品种(系)为S(RfRf)、N(RfRf)，以？代表不明确的细胞质．那么其原理如下图所示； 特点：费时费力，且每种杂交组合只能确定待鉴定油菜和某种已知细胞质类型油菜是否为相同的细胞质。例如，利用Polima的保持系“湘矮B”为测交种，只能鉴定待测材料的细胞质是否Polima；如果不是，则它到底是那种类型，还要用其他细胞质类型的保持系做测验种，进行上述试验。 随着分子生物学理论和技术的发展，有些研究者已通过分离提取油菜线粒体基因组（mtDNA），利用mtDNA-RFLP标记区别和鉴定油菜各种细胞质类型。 特点：利用mtDNA-RFLP标记鉴定油菜细胞质类型的方法，与普通遗传学方法比较，实验周期大大缩短，但是该方法需分离纯化油菜线粒体和提取线粒体DNA，以及进行mtDNA的限制性酶切和酶切片段的分离检测，操作程序繁琐、复杂、技术难度大而且成本高。 目前，甘蓝型油菜Nap细胞质类型的线粒体全基因组已被测序。国内外研究已表明，不同油菜细胞质类型的mtDNA组织结构差异较大；油菜细胞质雄性不育系的线粒体基因组中具有与其细胞质雄性不育相关的特异基因片段。研究已揭示出Ogu、Nap和Pol等不育系的不育性状相关的线粒体基因序列分别为其mtDNA的特异读码框Orf138、orf222/nad5c、以及Orf224/atp6。危文亮等根据油菜线粒体基因Orf138、orf222/nad5c、以及Orf224/atp6序列和已发表的拟南芥线粒体基因组序列设计PCR引物，可特异扩增出目标片段。mtDNA这些特异基因序列是受细胞质遗传的，不受油菜细胞核基因以及环境因素的影响。因此，依据不同细胞质类型油菜线粒体DNA特异序列开发的分子标记可作为鉴定油菜细胞质类型的可靠分子标记。 2. 简述油菜杂种优势利用的主要途径及特点。 （1）无性繁殖法 无性繁殖作物一般是把它们的营养器官或特殊器官从其母体分离出来进行繁殖。但是在适宜的自然和人工控制的条件下，无性繁殖作物也可有性繁殖，进行杂交育种。马铃薯和甘署就是这类无性繁殖作物。由于这类作物其遗传基础是杂合的．为了提高育种效果，增强杂种优势，不论是异花授粉的甘薯，还是自花授粉的马铃薯．在进行有性杂交前，最好进行多代自交．选育性状优良的自交系，然后杂交，获得自交系间杂种。如果其杂种优势很强，通过块根或块茎等进行无性繁殖．这样能在较长时期内维持F1代的优势水平，而不必年年生产F1代种子．这是无性繁殖类作物利用杂种优势的主要特点。 （2）多倍体法 a.双二倍体法 王鸣(1978)提出用双二倍体法固定杂种优势。双二倍体是指2n＝4x＝AABB的异源四倍体，由于每种染色体组都有两个，同源染色体那是成对的，因而减数分裂时都像二倍体一样联会成二价体，所以异源四倍体表现与二倍体相同的性状遗传规律。获得双二倍体是有效地固定杂种优势的可能途径之一。大家知道：在油菜的起源、进化过程中，有一个著名的“禹氏三角”．它表明了姜墓属植物中与油菜密切相关的各个物种之间的关系。 b.利用多倍体亲本进行杂交，部分地固定杂种优势 特点：赵世绪(1978)提出：用秋水仙素处理杂交亲本，人为地使染色体加倍成为同源四倍体。二个同源四倍体杂交产生的杂种一代．无论是自交或相互杂交，虽然也要分离，但第二代中杂合个体数目比二倍体杂种二代要多．而纯隐性个体的出现绿率比二倍体少。 （3）染色体易位 易位是指某染色体的一个区段移接在非同源的另一个染色体上。倘若两个非同源染色体都折断了，而且这两个折断了的染色体及其断片随后又交换地重新接合起来．就叫做相互易位。 特点：一系列的易位突变与正常配子结合的杂交种，就不可能产生