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2016-2017年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR荧光探针法)
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒
样本要求
适用标本类型：血清或血浆
标本采集
血清：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温放置30—60min，血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5分钟，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管
血浆：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入含EDTA-2K或枸橼酸钠的玻璃管，立即颠倒玻璃管混合5—10次，使抗凝剂和静脉血充分混匀，5—10分钟后即可分离血浆，转移至1.5 ml灭菌离心管
标本保存与运送：所采集的标本可立即用于测试，也可以保存在—20℃待测，保存期为6个月，标本运送采用0℃冰壶。
检验方法
1.DNA提取（样品制备区）
将待测样本、阳性定量参考品、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品进行同步处理。
1）取200μl样品，加入450μlDNA提取液I和4μl的内标溶液，用振荡器剧烈混匀15秒，瞬时离心数秒。100℃恒温处理10±1分钟
2）12000rpm离心5分钟，备用
2. PCR试剂准备（试剂准备区）
直接使用HBV-PCR反应管
3.加样（样品制备区）
往上述HBV反应管中用带滤芯吸嘴分别加入待测样本、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品和阳性定量参考品的上清液各20μl。盖紧管盖，8000rpm离心数秒后转移至扩增检测区。
4.PCR扩增（扩增和产物分析区）
5.结果分析
反应结束后自动保存结果，根据分析后的图像调节baseline值得Start值、End值以及Threshold值，点击Analysis自动获取分析结果，在Repoet界面查看结果，记录未知样本数值（C）
6.质量控制
(1)阴性质控品：FAM通道无对数增长期或Ct值等于30， VIC检测通道扩增曲线为明显对数增长期
(2)HBV阳性质控品：FAM通道有明显的对数增长期且Ct值小于30
(3)HBV阳性定量参考品：FAM通道有明显的对数增长期，呈典型S形曲线。CT29且R20.98
7.结果判断
（1）如果在FAM通道无明显的对数增长期或Ct值等于30，在VIC检测通道扩增曲线有对数增长期，则判定样本的HBV DNA浓度小于检测灵敏度。
（2）如果在FAM通道有对数增长期或Ct值小于30
则1）若样本的C100，则样本的HBV DNA浓度100IU/ml
2）若样本的100《C《5.00E+008，则样本的HBV DNA浓度= C IU/ml
3）若样本的C5.00E+008，则样本的HBV DNA浓度5×10 ? IU/ml
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