生物实验常用溶液配制(整理版).docVIP

生物实验常用溶液的配制 一、DNA电泳相关： 1、DNA电泳缓冲液： （1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。 ① TAE使用液： 1×：40mmol/L Tris-乙酸 1mmol/L EDTA ② TAE贮存液（每L）： 50×：242g Tris碱 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） （2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液： ① TBE使用液： 0.5×：0.045mol/L Tris-硼酸 1mmol/L EDTA ② TBE贮存液（每L）： 5×： 54g Tris碱 27.5ml 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） （3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液： ① TPE使用液： 1×：90mmol/L Tris-磷酸 2mmol/L EDTA ② TPE贮存液（每L）： 10×：108g Tris碱 15.5ml 85%磷酸 40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程： ①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）； ②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀； ③迅速倒入备好的胶模中； ④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中； ⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）； ⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样； ⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min左右）； ⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。 二、12％ SDS的相关溶液 1、5×加样缓冲液： 10% w/v SDS，10 mM DTT或β-巯基乙醇，20% v/v甘油，0.2M Tris-HCl pH 6.8，0.05% w/v 溴酚蓝。 （注意：将不含DTT的1×SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存，临用前从1mol/L DTT储液中添加到上述缓冲液中。） 5×Sample Buffer： 10% w/v SDS 10 mmol/L Dithiothreitol,or beta-mercapto-ethanol 20% v/v Glycerol 0.2 mol/L Tris-HCl pH 6.8 0.05% w/v Bromophenolblue 另：2×SDS 上样液缓冲液: 100mL溶液中含0.5mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 20mL , SDS 4 g ,甘油20 mL , 溴酚蓝0.2 g ,DTT3g; 2、1×电泳缓冲液： 25 mM Tris-HCl pH 8.8，200 mM 甘氨酸，0.1% w/vSDS。 1×Running Buffer 25mmol/L Tris-HCl pH 8.8 200～250mmol/L Glycine（电泳级）（pH 8.3） 0.1% w/v SDS 可以配成5×贮存液，在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸，然后加入50ml 10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补至1000ml即可。 3、分离胶配方： H2O 10.5，1.5 M Tris-HCl pH8.8 7.5，20% w/v SDS 0.15，30% 丙烯酰胺 / 0.8% 亚甲双丙烯酰胺(/w/v) 12.0，10% w/v 过硫酸铵 15，TEMED 0.02（单位：mL，总体积25 mL）。 注：过硫酸铵会缓慢分解，故应每周新鲜配制，可用去离子水配制少量10%（m/v）储存液于4℃保存。 Running Gel Solution (mL) ： H2O 10.2 1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8