.2014养殖细胞生物学实验指导书.docVIP

目 录 实验一 细胞凝集反应 实验二 细胞膜的渗透性 实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察 实验四 细胞中多糖和过氧化物酶的定位 实验五DNA和RNA的细胞化学——Feulgen反应和Brachet反应 实验六 动物染色体标本的制备与观察 实验七 植物细胞骨架的光学显微镜观察 实验八 细胞核与线粒体的分级分离 第一部分 细胞生物学实验 实验一 细胞凝集反应 实 验 原 理 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素是细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 实 验 用 品 1．器材 显微镜、粗天平、载玻片、滴管、离心管 2．试剂 PBS缓冲液、生理盐水 3．材料 土豆块茎、2％的红细胞 实 验 方 法 1．用肝素润洗一次性注射器，抽取鱼血，用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配制成2的红细胞液。 实验二 细胞膜的渗透性 实 验 原 理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶剂透入速度各不相同，因此溶血时间也不相同。 实 验 用 品 1．器材 50ml小烧杯，10ml移液管，试管，试管架 2．试剂 0.17mol/L氯化钠、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮 3．材料 鱼血 实 验 方 法 1．羊血细胞悬液 用肝素润洗一次性注射器，抽取鱼血，取50ml小烧杯一只，加1份鱼血和10份0.17mol/L氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鱼血。 2．低渗溶液 取试管一支，加入10ml蒸馏水，再加入1ml稀释的鱼血，之一观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100％红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 3．鱼红细胞的渗透性 （1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的鱼血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？ （2）取试管一支，加入0.12mol/L硫酸钠溶液10ml，再加入1ml稀释的鱼血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间。 （3）分别再另外几种等渗溶液中进行同样实验。步骤同2。 实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察 实 验 原 理 超活染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。超活染色可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染是由活的动植物分离出部分细胞或组织块，以染料溶液浸没，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 在超活染色中应选择对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配制成稀淡的溶液来使用，一般是以碱性染料最为适用，可能是由于它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 詹纳斯绿B可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。 中性红对液泡系（高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中的某些蛋白质有关。 实 验 用 品 1．器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、表面皿、吸管、牙签 2．试剂 （1）Ringer溶液 氯化钠 0.85g 氯化钾 0.25 g 氯化钙 0.03 g 蒸馏水 100ml （2）1%、1/3000中性红溶液 称取0.5 g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30-40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，