病理切片石蜡切片制作过程中注意事项.PDF

病理切片、石蜡切片制作过程中注意事项 病理切片是病理医生用来诊断患者疾病的主要手段之一。病理切片制作过程复杂漫长， 影响病理切片制作质量的因素众多，常见问题归纳如下： 一、固定标本要充分及时：固定标本是制片的第一个环节；固定时间不合适或者固定不正确 的组织，在染色时常会出现较浅的核质着色和轮廓不清，还会出现不同程度的片状发白区； 固定液的浓度要适宜，固定标本的正确方法为：组织离体后快速放入适宜浓度的固定液中， 固定液的量大约为标本体积的7倍左右，盛放标本的容器以不使标准变形为宜，大小适中。 二、规范对标本进行取材：取材的原则为：保持病变的特征和器官的完整性。尽量修除无关 组织，切面尽量做到平整，原则上小标本要全部制片，大标本宜在病变部位以及病变部位与 正常组织交界处多处取材。 三、及时更换试剂：在整个切片过程中，试剂的使用比较频繁，试剂的浓度改变，会影响到 组织的脱水、透明、浸蜡效果，有些试剂因为挥发到别的试剂中，甚至会导致对病理组织的 污染，从而产生误诊。因此，制片过程应注意观察试剂情况，根据标本量的大小及时更换试 剂，确保组织处理达到要求。 四、组织包埋、切片：小块组织要采用线状包埋，大块组织要在包埋时整理平整，以防出现 切片不完全或片内组织杂乱而造成诊断医师误诊[3]。切片机应随时检查刀口是否钝化，随 时保持刀口锋利以防出现切片断裂、破碎的情况。切片力求完整，尽量将每块组织切到最大 面，以防发生漏诊。 五、 染色、封固要仔细，掌握好烤片条件：一般为60℃烤片0.5～1 h，过高温度和过长时 间都会导致组织发黑，染色不清；脱蜡过程也相当重要，如果出现脱蜡不干净，那么就会出 现切片不易着色和着色不匀的情况。盐酸乙醇的分化是影响染色效果的关键环节。分化不足 和过度都会导致染色失败。树胶的稠度也应适中，树胶过稀过多会发生溢胶，树胶过稠过少 又会出现封片不全或空泡。完成切片固封后，应及时贴好标签，防止出现混淆事故。 六、加强操作人员的工作责任心，减少因人为因素导致差错事故及坏片的发生。 病理组织石蜡切片注意事项： 一、组织固定取材 临床所取标本要新鲜，否则细胞内溶酶体会破裂，造成细胞自溶。组织固定液多选用10% 中性福尔马林，其有效成分为甲醛，甲醛易挥发，使得福尔马林的效用会越来越低，所以福 尔马林最好现配现用; 固定液体积要超过标本的10～ 20 倍，否则固定不充分，影响染色; 固定标本的容器要以使标本不变形为宜；取材时，除严格按照病理标本取材操作规范外，小 标本一般全取，大标本在去除不必要的组织后，要特别注意病变部位与正常组织交界处；取 材切片观察面要平整，否则组织经脱水后变韧，导致组织包埋时不能压平于包埋盒中，切片 时修整蜡块很繁琐。 二、脱水包埋 现组织多采用程序化脱水浸蜡，所以要根据标本的多少及大小及时更换脱水机内试剂， 否则会影响脱水效果，使组织与蜡不能相溶，无法制作出合格的组织蜡块。条件允许的情况 下可根据组织标本的不同选择合适的石蜡，组织韧性大选择高熔点石蜡，组织软选取低熔点 石蜡。包埋时，组织要充分压平于包埋模底部，以保证组织的预期观察切面在同一水平; 先 向包埋盒中灌滴少许液体石蜡，此步骤可使成型蜡块底部光滑平整，再将组织观察面压平于 包埋盒底部，组织摆放紧凑但不重叠。为使包埋组织的蜡块快速凝固，一般先将浸液体蜡的 包埋盒置于冷冻台上，蜡块在置于冷冻台上后，应在蜡大部分或完全凝固后，再移动包埋盒; 若蜡块未完全凝固，而移动了包埋盒，成型蜡块底部平整度相差甚远，有的凝固蜡块底部平 整，有的蜡块底部不平整，可致小标本在修片的过程中被浪费。 三、切片 切片时常见问题及常用解决方法如下: (1) 切片横向褶皱过多，不能成带。原因: 蜡块温度过高; 切片刀变钝; 切片刀边缘粘有少 量石蜡。解决方法: 将蜡块重新放置冰袋或冷冻盒上，使蜡块降温; 更换切片刀的位置，或 换新的切片刀; 或用水沾湿纱布，顺切片刀刀口方向，轻轻擦拭切片刀。 (2) 切片上有位置固定的一道或几道裂缝或裂纹。原因: 切片刀有小缺口; 蜡块内有杂质或 体积较小的似骨( 钙) 化性较硬的组织; 包埋时蜡块不均匀凝固。解决方法: 移动切片刀或 更换新的切片刀; 用少量盐酸软化硬的钙化性组织; 重新包埋蜡块。 (3) 切片上有位置不定的数道小裂缝或裂纹。原因: 蜡块温度过高; 切片刀变钝。解决方法: 将蜡块重新放置冰袋或冷冻盒上，使蜡块降温; 更换切片刀的位置，或更换新的切片刀。 (4) 切出的蜡条明显向一侧弯曲变形。原因: 弯