酶反应动力学 - 教学.pptVIP

酶促反应动力学;(一) 酶促反应动力学的基本公式-米-曼氏方程(二) 米-曼氏方程所确定的图形是一直角双曲线(三) 米-曼氏动力学参数的意义(四) 米-曼氏方程的线性化作图求Km和Vmαx值;1913，德化学家Michaelis L和Menten M 根据中间产物学快速平衡模型或平衡稳态模型，称为米-曼氏模型。;基于快速平衡模型或平衡稳态模型的米氏方程: 早年的米式方程 最初，Michaelis 和 Menten 根据“快速平衡假说”推出米式方程。 快速平衡假说：一些假设;k-1;steady-state theory：反应进行不长的一段时间内(几毫秒，前稳态)，系统的ES浓度由0增加到一定数值，在一定时间内，尽管底物浓度不断变化，ES也在不断合成和分解，但是当反应系统中ES的生成和分解速率相等时，络合物ES的浓度保持不变，这种状态称为稳态;ES生成速度：K1([Et] - [ES])[S] ES分解速度：k2[ES]+k-1[ES] 稳态时：k1([Et] - [ES])[S] = k2[ES]+k-1[ES];(二) 米-曼氏方程所确定的图形是一直角双曲线;从米-曼氏方程或其曲线可以看出三种情况：;(三) 米一曼氏动力学参数的意义;米氏常数KM是 v0=1/2 Vmax时的底物浓度。遵循米-曼氏动力学的酶,也称为米-曼型酶, 是指呈现v0对[S]的双曲线关系的酶。 KM的真实意义决定于酶促反应机制的特定方面, 如反应步骤数目和各步的速率常数。对于简单的二步反应： KM=(K-1+K2)/K1 ;第一步是快速平衡,第二和第三步是慢速过程。应用稳态假设, 从上面模型可以导出胰凝乳蛋白酶催化水解的稳态速率;P1;;2. Kcat 的意义：催化常数或转换数;胰凝乳蛋白酶催化某些底物时k2k3，此时kcat=k2；对另一些底物k2k3，kcat= k3。 Kcat 一级反应速率常数，因此量纲是时间-1如min-1，s-1。 kcat有时也称为酶的转换数(turnover number, TN)，它是酶的最大催化活力的量度，即在酶被底物饱和时每一酶分子或每一活性部位(对多亚基酶而言)在单位时间内被转变为产物的底物分子数。转换数也称为酶的分子活力(molecular activity)或催化中心活力。只要反应混合液中酶的总浓度[Et]为已知， kcat 即可从V max 算出。;当[E]和[S]均为变量时，Kcat 是 E+S→E+P 反应的表观二级速率常数(单位mol-1·s-1·L)； Kcat/KM 可作为在远低于饱和量的底物浓度下酶的催化效率指数。此参数常用来比较不同酶的催化效率，特别是比较同一个酶对不同底物(竞争性底物)的催化效率，因此也称为专一性常数。 当酶与底物的相互碰撞是限速步骤时，Kcat/KM可代表真实的微观速率常数。当K2K-1时，KM=k2/k1, 而kcat=k2，;k1存在一个上限，取决于酶与底物在水溶液中的碰撞频率。如果每次碰撞都能形成ES复合体，则根据扩散理论预言，k1将约为108 －109mol-1·s-1·L，这是扩散控制的极限范围。酶的催化效率不能超过此极限范围。;直接按米-曼氏方程作图，通过渐近线求出Vmax，再从Vmax/2 求出相应的[S]，即KM。不准确，只能得到Vmax和KM的近似值，即使[S]足够大，v0也很难达到渐近线水平(Vmax)。;米-曼氐方程线性化: 最常见的变换形式是Lineweaver-Butk方程;一、有关的化学动力学概念（自学）二、底物浓度对酶促反应速率的影响三、多底物的酶促反应四、影响酶促反应速率的其他因素五、酶的抑制作用;三、多底物的酶促反应;双底物酶促反应有三种机理：;1. 序列(sequential)或单置换(single-displacement)反应机制;谷丙转氨酶;一、有关的化学动力学概念（自学）二、底物浓度对酶促反应速率的影响三、多底物的酶促反应四、影响酶促反应速率的其他因素五、酶的抑制作用;(一) pH对酶促反应的影响(二) 温度对酶促反应的影响(三) 激活剂对酶促反应的影响;(一) pH对酶促反应的影响;植物和微生物来源的酶：pH 4.5～6.5 ； 动物来源的酶：pH 6.5～8.0之间。例外情况，胃蛋白酶 pH 1.9，胰蛋白酶 pH 8.1，肝精氨酸酶 pH 9.0； 酶的最适pH只在一定条件下才有意义。;温度系数Q10： 温度升高10℃，反应速度与原来的反应速度（或是速率常数与原速率常数）之比，Q10一般为1~2。 最适温度范围： 温血动物的酶，35℃-40℃； 植物酶40℃-50℃； 细菌Taq DNA聚合酶，70℃。;（三）激活剂对酶反应速