2013临床PCR检测技术_实习生讲课.pptVIP

（二）结果分析、报告及解释 1.定性PCR与定量PCR的比较 2.定量PCR测定的临床意义 3.定性PCR测定的临床意义 4.定性和定量测定的结果报告及解释 1.定性PCR与定量PCR的比较 琼脂糖凝胶电泳 定量PCR扩增曲线图 2.定量PCR的临床意义 对致病微生物核酸含量进行定量检测 弥补免疫检测的缺陷 缩短诊断的窗口期（如HBV,HIV） 对治疗过程进行药物疗效监测 用于基因表达方面的研究 某患者HBV-DNA的PCR结果动态图 日期 HBV-DNA 2004-6-3 9.3E+7 2004-12-7 2.0E+6 2005-4-19 1.8E+3 2005-7-25 0.0E+0 3、定性测定的临床应用 诊断 用于筛检 耐药突变检测 病毒基因型检测 GG AG GG AG AA AA 4.定性和定量测定的结果报告及解释 （1）定性 阴性 阳性 （2）定量(以我科参考值为例) HBV-DNA100 IU/ml(不同项目数值不同) 大于参考值，在检测范围之内，是多少报多少。 大于107拷贝/ml，日常生活接触强传染性。 小于105拷贝/ml，日常生活接触传染性较小 但不管HBV-DNA的浓度为多少，哪怕是低于检测下限，也均会引起输血后的感染。 （3）血浆HBV-DNA浓度与传染性强弱的问题 谢 谢 * PCR is a method for rapid amplification of specific target segments of DNA or cDNA in vitro copying of DNA or cDNA PCR products are called amplicons * * You know this slide in depth - but remember, some of the audience does not - this is not a chemistries talk - you can talk about specific chemistries during QA or after the seminar - this is just an overview of types of chemistries used on the iQ. * * 7700: 6- 8 sec scan one plate 5700: 15 sec for one plate scan Probe Tm: 68 to 70 degree. Under this high temperature , Taq DNA polymerase need to cleave DNA when probe is not perfect match( ex: AD) Taq DNA polymerase just kick out the probe * * 定量PCR（quantitative PCR） 用PCR方法定量主要有两种： 终点定量（end point PCR）在PCR循环结束后对PCR扩增产物进行测定量化，而PCR到达平台期时检测重现性差，无法准确定量。 对数期定量（Log phase PCR）在PCR的对数增长期对PCR扩增产物进行测定量化，最大定量范围可达到10个数量级，如荧光定量PCR。 * * * * Want to compare the fold difference in expression of one treatment condition to another or one tissue type to another Samples are extrapolated off of the standard curve, and result in data with either total NA concentration or dilution factor. Some what meaningless. 临床PCR技术 Kary B. MullisUSA, for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) method 1930年提出了两种核酸DNA和RNA的概念 1953年Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构及其半保留复制模型。 一、PCR概述 一、PCR概述 （一）PCR概念 PCR （polymerase chain reaction)是一种在体外通过重复DNA合成，以扩增特定核苷酸序列的方法。 特点 高灵敏度 高特异性 体外进行 快捷 PCR的概念 核心技术是从水栖高温菌中分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反应不需要每一个循环加一