感受态细胞制备与保存方法的比较研究.pdfVIP

第 15 卷第 1 期 :52 生 　物 　技 　术 Vol15 ,No1 :52 　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　 2005 年 2 月 BIOTECHNOLOGY Feb2005 生 ,因此可以发现一些菌落有明显的滞后现象 ,如图2 中滞后 取质粒 DNA 的繁琐步骤 ,获得令人满意的结果 。在悬浮液中 的菌落为 1 、3 、4 号菌落 。菌体电泳滞后的菌落经提取质粒酶 加入 RNase A 可以消除菌液裂解后产生大量 RNA 的影响 , 降 切电泳确认 , 电泳滞后的 1 、3 、4 号菌落所提取的质粒 DNA 经 低背景便于电泳分析 ,在实际应用可以不添加 。在运用这种 提取质粒酶切后都能切下一条与外源片段大小相符的片段 方法筛选重组子过程中我们发现 , 当载体为 3kb 时 ,外源片段 ( 图2) ,酶切分析的结果表明滞后的菌落都连接上了外源片 大于 100bp ,使用 1 %琼脂糖电泳就可以观察到明显的滞后现 段 , 同时也说明菌液碱裂解法直接电泳筛选的结果是可靠的。 象 ,片段越大滞后越明显 。如果插入的片段过小时电泳滞后 筛选转化重组子有多种方法 , PCR 菌落分析法能够最快地筛 不明显时这种方法这不适用 。对有蓝色白色筛选标记的载 选到重组子 ,但在实际运用中确实存在 PCR 不稳定的现象 ,而 体 ,此方法能够快速排除假阳性 ,如果无蓝色白色筛选标记的 [2 ] α 且需要合成反应引物 ,增加了筛选成本 。 互补蓝色白色 载体 ,这种方法可以进行大量的转化子筛选 ,更体现为一种经 筛选是一种简单的筛选方法 ,但在实际运用中存在不少的假 济 、快速的重组子筛选方法 。 阳性 ,需要进一步验证 。提取小量质粒 DNA 进行限制性酶切 参考文献 : 电泳分析 ,是一种最准确的分析 ,但费时、成本高 ,一般用于重 组子的最后鉴定 ,这种方法对没有筛选标记的载体进行大量 [ 1] [ 美]J 萨姆布鲁克 ,D W 拉塞尔. 分子克隆实验指南[M ] 第 3 版 的筛选时不仅会增加工作量也会增加实验成本 。本文方法根 北京 :科学出版社 ,200326 - 32 据碱裂解提取质粒的原理 ,用碱裂解菌液使质粒 DNA 从宿主 [2 ]金红 ,李媛 ,邓国华. 一种快速鉴定重组转化子的方法[J ] 生物技 菌中释放出来 ,然后直接进行琼脂糖电泳分析 ,不仅省去了提 ( ) 术 ,1998 ,8 6 :41 - 44 感受态细胞制备与保存方法的比较研究