Pygo2过表达促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖-Core.PDF

中国医科大学学报 第41 卷 第5 期 2012 年5 月 413 Journal of China Medical University Vol.41 No.5 May 2012 · · P ygo2 过表达促进大鼠胶质瘤C6 细胞增殖 1，2 1 1 1 1 1 陈玉英 ，王海东，王占祥，谭国伟，刘希尧，沈上杭 （1．厦门大学附属第一医院神经外科，福建厦门361003；2.重庆邮电大学生物信息学院，重）庆400065 摘要 目的 通过构建过表达Pygo2 的重组体上调Pygo2 表达，探讨其在大鼠胶质瘤C6 细胞增殖中的作用及机制。方法 重 组体经EcoR I 和Hind Ⅲ双酶切鉴定和DNA 测序后，用脂质体2000 将其转染大鼠胶质瘤C6 细胞，采用Western blot 检测外源 Pygo2 蛋白表达，应用克隆形成实验和MTT 法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，采用Western blot 检测过表达Pygo2 对 C6 细胞中cyclinD1、β-catenin 水平的影响，并采用细胞免疫荧光法检测其对C6 细胞中cyclinD1、β-catenin 亚细胞定位的影响。 结果 双酶切和测序鉴定结果证实插入序列正确，重组体能有效上调Pygo2 表达。将重组体转染C6 细胞上调Pygo2 表达后， 细胞的生长增殖被显著促进，克隆形成显著增多，细胞周期进程从G1 期至S 期转变显著增强；且cyclinD1 水平随之增高，亚定 位无改变，β-catenin 水平和亚细胞定位无明显改变。结论 成功构建了过表达Pygo2 的重组体，过表达Pygo2 通过增高 cyclinD1 水平，促进细胞从G 期进入S 期，从而促进大鼠胶质瘤C6 细胞增殖。 1 关键词 Pygo2 ；胶质瘤；细胞增殖；cyclinD1 中图分类号 R739.41 文献标志码 A 文章编号 0258-4646 （2012）05-0413-05 网络出版地址 /kcms/detail/21.1227.R1555.027.html Over-expression of Pygo2 Promotes C6 Cells Proliferation of Glioma 1，2 1 1 1 1 1 CHEN Yu-ying ，WANG Hai-dong ，WANG Zhan-xiang ，TAN Guo-wei ，LIU Xi-yao ，SHEN Shang-hang （1. Department of Neurosurgery，First Hospital Affiliated to Xiamen University，Xiamen 361003 ，China；2. College of Bio-information ，Chongqing University of Posts and Telecommunications ，Chongqing 400065，China） Abstract Objective To up-regulate expression of Pygopus2 （Pygo2）by construction of the recombinant vectors of over-expression of Py－ go2 protein ，and to explore the role and mechanism of over-expression of Pygo2 in C6 cells proliferation of glioma. Methods The recombi－ nant plasmids were dig