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睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞凋亡途径研究* 1 1 2 2 金凌艳 ，艾晓杰 ，刘立民 ，乔中东 （1． 上海交通大学农业与生物学院，上海 201101； 2．上海交通大学医学院，上海 200240 ） E-mail ：chelseajin@ 摘 要：用睾酮诱导，研究小鼠骨髓巨噬细胞（BMMs ）凋亡过程中Fas/FasL 途径上caspase-8 表达的改变。以BMMs 经L929 条件培养基（LCM ）诱导5d 后，用流式细胞仪分选出F4/80 阳性细胞，并将细胞分为两大组。第一组是空白对照组，睾酮 （100nM ，下同）处理组，去 除LCM 组，去除LCM 同时用睾酮处理组。第二组用FADD 反义寡核苷酸 （ASODN ）转染 BMMs 后，重复第一组的四个处理组，并以FADD 错义寡核苷酸 （MSODN ）转染后的睾酮 处理组作为对照。处理12h 后，用流式细胞仪检测巨噬细胞的凋亡情况，并通过RT-PCR 、 Real-time RT-PCR 和Western Blot 方法检测各组中caspase-8 基因及蛋白的表达。我们的结 果显示，在缺少LCM 或用睾酮处理时，睾酮可在体外诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡，并伴随 caspase-8 的活化。FADD 反义寡核苷酸能抑制睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞的凋亡，其下游 的caspase-8 表达也被抑制。 关键词：睾酮；凋亡；小鼠骨髓巨噬细胞；caspase-8；反义寡核苷酸 1 引言 造血干细胞在适当的细胞微环境中能形成髓系造血祖细胞，并进一步分化形成单核细胞 而进入血液循环。单核细胞在趋化因子、多肽类和非多肽类调节因子的刺激下游走和分化， 进入组织或体腔，形成不同组织的巨噬细胞。 自1969 年发现雌激素能够增强巨噬细胞的吞噬功能以来，性激素与巨噬细胞功能的相 关报道逐渐增多[1]，人们推断巨噬细胞可能参与了性激素对免疫系统功能调节。生理剂量的 睾酮可影响大鼠巨噬细胞中活性氧媒的产生，也可增强脂多糖刺激后巨噬细胞中IL- 1 的产 生。实验发现，降低雄性动物体内雄激素水平的操作如睾丸切除术或辐射损伤性腺，可增强 动物抗利什曼原虫感染的能力，而雌性小鼠在注射睾酮后抗原虫感染的能力也有所下降，因 此，体内雄激素水平的变化直接影响到巨噬细胞的功能。 雄激素还参与了巨噬细胞凋亡的调节，在体内、外都可改变巨噬细胞凋亡的进程。研究 证实巨噬细胞凋亡在其功能发挥中有重要作用[2-3] ：①衰老的巨噬细胞经历了瞬时凋亡，它 们的清除速率与机体生成新的巨噬细胞的凋亡速率相同。②感染了微生物的巨噬细胞发生凋 亡有利于消除这些病原微生物。③活化的巨噬细胞是宿主防御系统的重要参与者，但是当其 失去控制时就会迅速导致败血性休克和死亡。而免疫系统中调控这些危险细胞的一个机制就 是凋亡，这意味着凋亡可能限制了炎性巨噬细胞强大的破坏力。④巨噬细胞也可通过介导和 调节自身及其他细胞的凋亡而发挥它的免疫调控功能。 研究发现[4]，睾酮可以增强小鼠骨髓巨噬细胞凋亡的过程中Fas，FasL (Fasligand,FasL) 以及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶 8 （caspase-8 ）表达的增加，提示Fas/FasL系统可能在 巨噬细胞的凋亡过程中起着重要的调控作用。本文将进一步证实睾酮能够诱导BMMs发生凋 亡，使下游的caspase-8 发生活化，且这一过程不受L929 细胞条件培养基（L929 cell conditioned medium,LCM ）的影响。此外，为了进一步证明Fas/FasL和caspase-8 之间的级联作用，以反 义技术阻断它们之间的接头蛋白——Fas 相关死亡域蛋白 （Fas associated death domain, * 作者简介：金凌艳 （1981-），女，上海青浦人，硕士，研究方向：细胞分子生物学. 艾晓杰，乔中东为通 讯作者.