侵染落葵的黄瓜花叶病毒分离物CP基因序列分析.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（２）：９６～１００ 侵染落葵的黄瓜花叶病毒分离物 ＣＰ基因序列分析 牛立霞　牛胜鸟　王健华　刘志昕 （中国热带农业科学院热带生物技术研究所 热带作物生物技术国家重点实验室　海口　５７１１０１） 摘要　通过间接酶联免疫法（ＩＤＥＬＩＳＡ）检测到染病落葵病样中存在黄瓜花叶病毒（ｃｕｃｕｍｂｅｒ ? ｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）。从病叶中提取总ＲＮＡ，用ＲＴＰＣＲ方法扩增得到６５７ｂｐ的ＣＭＶＣＰ基因片 ? 段，将扩增产物与Ｔ载体连接并进行测序。用ＤＮＡＭＡＮ将得到的ＣＰ基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ收录 的黄瓜花叶病毒两亚组部分株系或分离物的ＣＰ基因序列进行比较，结果表明该ＣＰ基因与ＣＭＶ 亚组 、亚组 之间的核苷酸序列同源性分别为９１．１７％～９５．４３％和７５．３０％～７５．７６％，推导氨 Ⅰ Ⅱ 基酸序列同源性分别为９５．４１％～９７．７１％和８１．２８％～８１．７４％，表明ＣＭＶＢａ与亚组 同源关 ? Ⅰ 系密切。 关键词　落葵　黄瓜花叶病毒　ＣＰ基因　序列分析 中图分类号　Ｑ７８ 　　落葵（ＢａｓｅｌｌａｒｕｂｒａＬ．）属落葵科植物，为一年生 状的落葵植株上采集了病叶，得到病毒分离物（ＣＭＶ? 藤本植物，俗名木耳菜、藤菜、承露、胭脂菜、御菜等，在 Ｂａ），并将克隆得到的ＣＭＶＢａ外壳蛋白 （ｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎ， ? 我国各地均有栽培，亚洲其它地区、非洲、美洲也有分 ＣＰ）基因与已报道的ＣＭＶ２个亚组的部分成员的ＣＰ ［１］ 布 。落葵不仅具有质地嫩滑、味道鲜美、营养丰富等 基因进行了序列分析和比较。 特点，而且还具有一定的清凉解热、解毒缓泄功能，可 １　材料与方法 算是一类药菜两用的蔬菜，深受广大人民的青睐，而且 成为宾馆饭店餐桌上具有新口味的高档蔬菜［２］。 １．１　材　料 　　但在生产过程中，无论采用何种栽培模式，落葵都 １．１．１　材料　罹病材料采自海南海口的菜地，置于－ 或轻或重受到多种病害的危害。已见报道的有顶套菌 ２０℃冰箱保存备用。 ［３］ ［２］ ［２，４～７］ １．１．２　抗血清和酶标抗体　一抗为本实验室制备的 属 、炭疽菌属和叶点霉属 、尾孢属 、琏格孢属 ［８］ ［９］ ＣＭＶ亚组 多克隆抗血清Ｂ，酶标记羊抗兔 ＩｇＧ为博 和色二孢属 以及短小杆菌属 真菌引起的叶斑病， Ⅰ ３ ［２，６］ 士德生物工程有限公司生产的碱性磷酸酯酶标记的 腐霉属真菌引起的霜霉病 ，葡萄孢属真菌引起的灰 ［２，５，６］ ［１０］ 二抗。 霉病 ，根结线虫引起的根结线虫病 ，而落葵病 ［１１］ １．１．３　酶与试剂　ＡＭＶ逆转录酶、ＲＮＡ酶抑制剂 毒病，仅见２００６年Ｈｕａｎｇ等 报道马铃薯Ｙ病毒引起 的皱缩花叶病。这些病害严重影响了落葵的品质和产 （Ｒｎａｓｉｎ）、ｄＮＴＰｓ为ＴａＫａＲａ公司产品，ＴａｑＤＮＡ聚合酶 量，制约了农民栽培的积极性。其中，近几年落葵花叶 购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司，ＰＣＲ产物回收试剂盒为ＴＩＡＮＧＥＮ 病发生普遍，种植效益随之下降。为了确定海南落葵 公