自噬活性调节胶质瘤起始细胞辐射敏感性的体内试验研究.PDF

第30 卷 第1 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.30, No.1 2012 年2 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. February 2012 自噬活性调节胶质瘤起始细胞辐射敏感性的体内实验研究 赵江虎 庄文卓 龙林梅 李 峰 梁中琴 （苏州大学医学部药理学系 苏州 215123 ） 摘要 为探讨自噬调节对胶质瘤起始细胞移植瘤辐射敏感性的影响，建立裸小鼠皮下移植瘤模型，测量肿瘤 体积大小，比较抑瘤率检测雷帕霉素对移植瘤的辐射增敏作用；建立裸小鼠颅内移植瘤模型，观察裸小鼠生 存期，HE 染色观察移植瘤的生长。取两种模型中各组肿瘤组织做Western blot ，分析自噬相关蛋白LC3 表达。 结果显示，裸小鼠皮下移植瘤模型中，联合治疗组的肿瘤体积明显小于阴性对照组和单纯辐照组（P0.05 ）， 抑瘤率明显增加（P0.05 ）；在裸小鼠颅内原位移植瘤模型中，联合治疗组的裸小鼠生存期较阴性对照组和单 纯辐照组明显延长，HE 染色中可见联合治疗组肿瘤生长局限，与周围正常脑组织界限清楚。Western blot 结 果显示，两种模型中，联合治疗组中的比值LC3II /LC3I 显著增加。研究表明，自噬激动剂雷帕霉素通过激活 胶质瘤起始细胞的自噬活性，增加胶质瘤的辐射敏感性。 关键词 胶质瘤起始细胞，自噬，辐射增敏，雷帕霉素，体内实验 中图分类号 R730.264 [1] + 放射治疗是胶质瘤术后有效的辅助治疗手段 。 [4]的方法，分离CDl33 细胞，置于含Bfgf （Bovine 然而，在放射治疗中，胶质瘤对放疗的抗性不断增 basic fibroblast growth factor ）（终浓度20 ng/mL ）、 加，相当一部分患者经过放射治疗后，肿瘤出现复 EGF （Epidermal growth factor ）（终浓度20 ng/mL ） 发。Bao 等[2] 报告，CD133 胶质瘤起始细胞 和N2 添加剂（N-2 Supplement ）的DMEM/F12(1: 1) （Glioma-initiating cells，GICs ）或者称为胶质瘤干 培养液中，于37℃、5% CO2 条件下培养。LC3 抗 细胞（Glioma stem cells，GSCs ）具有一定的放射 体：Cat: PD014，PD015 ，MBL 。β-actin 抗体：clone 耐受性，推测可能与放射损伤后早期启动 DNA 修 EP1123Y ，Abcam 。雷帕霉素：Cat: R0395，为Sigma 复机制有关，虽然确切的分子机制尚不十分清楚， 试剂。 但为恶性胶质瘤耐受辐射机制的研究提供了新的切 1.2 实验动物 入点。本工作已经通过体外实验证明胶质瘤起始细 胞的基础自噬活性很低，经自噬激动剂雷帕霉素[3] NC 裸小鼠由 SPF 动物房提供[合格证号为 处理后，再经X 射线照射，胶质瘤起始细胞的辐射 SYXK(苏)2007-0035] 。裸鼠，BALB/C nu/nu ，鼠龄 敏感性明显增加。 在5 周至7 周，体重18–20 g，雌雄兼用。接种肿 本文是在体外实验的基础上，建立裸小鼠皮下 瘤的裸小鼠继续饲育于 NASA1000 级生物净化室 移植瘤模型和裸小鼠颅内原位移植瘤模型，观察自 内，按SPF 级管理。 噬激动剂雷帕霉素对胶质瘤起始细胞移植瘤的辐射 1.3 照射方法 增