BrMC对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞功能和特性的影响.pdf

摘要 cancerstem cells， 对人肝癌SMMC．7721细胞系肝癌干细胞(1iver transition，EMT)、侵袭性和致瘤性的影响，并初步探讨其作用机制， 为肝癌的药物治疗提供新的思路和理论依据。 方法： 1．肝癌干细胞的分离及鉴定研究：体外培养人肝癌SMMC．7721细胞 1 系细胞，以CD33免疫磁珠分选法从SMMC．7721细胞系分选得到 CDl33+细胞，以干细胞条件培养基悬浮培养富集法富集并扩增 胞术分析CDl33阳性细胞百分率；肿瘤球形成试验测定自我更新能 力；裸鼠皮下成瘤实验检验致瘤性。 药物处理24．72h。采用光学显微镜观察细胞形态；四甲基偶氮噻唑蓝 (MTT)LK色法检测细胞增殖活性；二次肿瘤球形成试验测定自我更新 能力；PE荧光标记CDl33流式细胞术分析CDl33阳性表达率； WesternBlot分析干细胞标志物CD44、上皮细胞标志物E．钙粘蛋白 occluden．1，ZO一1)、间质细 (E-cadherin，E-cad)、紧密连接蛋白(zonula 达；Transwell小室侵袭试验分析体外细胞侵袭能力；原代接种裸鼠 移植瘤模型治疗实验和二次裸鼠皮下成瘤实验评价体内治疗效果。 DMSO)和BrMC处理组(O．1、O-3、1．0 验测定自我更新能力。 让甲 三口7R： 胞在干细胞条件培养基悬浮培养条件下非锚定悬浮生长，CDl33+肝 癌成球细胞CDl33+阳性表达率提高；具有自我更新能力及高致瘤性。 原代皮下接种裸鼠移植瘤生长、二次裸鼠皮下移植瘤形成和生长的作 用。 特异性siRNA转染下调LCSCs 1T 异。tO-siRNA下调LCSCs 表达和抑制自我更新能力作用。 结论： 1．联合CDl33免疫磁珠分选法和干细胞条件培养基悬浮培养富集法 功能和特性。 肝癌干细胞功能和特性的作用。 抑制SMMC．7721细胞系LCSCs特性。 关键词：肝肿瘤；8．溴．7．甲氧基白杨素；肝癌干细胞；Twist；治疗 作用 III ABSTRACT effectsof Objective：Toinvestigate onthecharacteristics including oflivercancerstem transition，invasion，and tumorigenicity cells(LCSCs) derivedfromhuman carcinomaSMMC一7721 celllineand hepatocellular its a new and basisfor preliminarymechanism，providesight theory a for in developingdrug carcinomathefuture． curinghepatoma Methods： 1．Isolationandidentificationoflivercancerstem cells：Human hepatoma carcinom