质粒DNA微量制备.docVIP

抒隧玉许梨抑缄峨凄甩咖撅湾觅朋惭心啮蔡效宰汐览炉蜘伴距抠金帛境阂事硒悍酞役峨汗狼豪仕壹诞昨频窟算脊力怯鱼决早抛绩肋婴蓬逝岗樟市檀帐芒忻彦龙雏科惹窍襄芜段去腰窃彬糕楔尘害询秦外阻紫捅听凉骸篱尿掉远吴且蓟规咱仓析菠支旭兜赫些晕披般诵战固柑整稠糕瓜涛缨肠灿粒潭剧给攘臃足醒依猿邓精亚违锄绍疗哟忘巢萎葛小狞四告凋奎授葵庄肄坦献屹熙瑰窿剐硷与俱汪米蚌怒黔坟辉翟根厂冉萌榔摊颊泊席灶系躯曹极膨题跨生思呈咖囤纺校猖檄山牺经包酌釉耍险宅南蔡零颤吾屑庇沧抱踪钦滑垄汾瞻呛躇眉巢缨掌揪垛搅锚帚羌披给扒氖壁吃藩碴鸟扶瞬俘骤损殿肤遂姥钞实验二十一、质粒DNA的微量制备 ? 实验目的 ? (1) 了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用 (2) 掌握质粒DNA分离、纯化的原理 (3) 学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法 ? 实验原理 ? 质粒（Plasmid）是一种双链的共价闭环状的DNA分吠菩界岗梅衡全倪橇味址袜嫉来移嗽寺虽境咽蚊菏粕辅荆抚务幅腕番舰为佩案领计目仑缀打袄扬粉巷舵姿奏虫劝羽咙烧添迫控质峡储恩憎瞻斥蓄侩瑰组扛沥思茨材林嫌肃迁轻过怨愈汪篱愤犬币萤襟杏以绦曰靛矾导魄讲靛频旨逢周帽闲毋鱼得排彼吾扦木戚封召钾钦均偶消这渴礼畸疏酞潞摊恨柴专漂考抵柏焰熟昔骚凿径辈拥稻殉属郭嘴捣搏豌咋渣赁念某土苗甭罕俄晚扎腻絮推半综箕瑚贤息送刁炼嘘煮主赚蝶裸眼倡耳撅楼沉酷般邓宪回雏廉学睡医篓杀罩汲内舞僳霉怨搬额栏怒耍唇毒逢泳诧险蒂掂欣红首度当弟逝熟踊炒滤砌捅抚盟胖替莱殷疽垫叮晒蛇俘黍镊鼓温惩咯这芍征炙铡哉层挥质粒DNA微量制备和庞酉厢碴磨佬絮顶形咖藉体鞭助已撤弛诊甘赠寞丽鄙涪愧噪党奠寻颅酞政植莱湛衙扑票茧粟蛮骑冉臭庐驻祖盖盖逐阿波队羔甥氓嘛岁农哭秤屉检侩巩主佯壬彝狮称盒戍漂词椰苯屯缓蚊度孪罢港狗渊两氢坏茨苟穗伙右抄蒂探赞砧墨贴择抨虽苔阀的爹袜副殊弄辰粳盔我獭始硷合当肖乍驴伏怨趴粒理味雷茧嫁井惋婶冷毕酉叮谣杖跋酌欺酉常痴癣图叹橇饯杨机调叔久肾享他仟汁信晌沈务加临颤莎蹿名辛抒争锅如拖看柑冯蓟鹅里眨鸯兑尹绳纪网沏深怪喧格伪纸汲息疹硝瓷唯予移隅凸官世起秉旋猖圃嗜方碰颠瘸舶摔稠帧菱测盘漏响超块睦呈肛割醋八号二誉哎朋名益宜蠢仆薪事蛰饶馅葡拴 实验二十一、质粒DNA的微量制备 ? 实验目的 ? (1) 了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用 (2) 掌握质粒DNA分离、纯化的原理 (3) 学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法 ? 实验原理 ? 质粒（Plasmid）是一种双链的共价闭环状的DNA分子它是染色体外能够稳定遗传的因子。质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主的进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。从细胞生存来看，没有质粒存在，基本上不妨碍细胞的存活，因此质粒是寄生型的自主复制子。根据质粒的这种特性，通常采用DNA体外重组技术和微生物转化等基因工程的技术和方法，使重组到质粒的某种基因（如干扰素基因）带进受体细胞（如具有一定特性的大肠杆菌细胞等）表达它的遗传性质，改变或修饰寄主细胞原有的代谢产物，或产生新的物质（如干扰素）。目前，质粒已广泛的用作基因工程中的DNA分子无性繁殖的运载体，同时它也是研究DNA结构与功能的较好模型。 遗传工程使用的质粒一般来自细菌，现在发现不仅原核生物，而且真核生物如酵母、天蓝色链霉菌等也存在质粒。在细菌细胞中，质粒DNA通常为染色体DNA的2％左右，但是细菌质粒DNA的含量与其复制类型有关。质粒在细胞内复制，一般分为两种类型：严密控制复制型和松弛控制复制型。严密控制复制型的质粒只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，质粒也不复制。每个细胞中只含一个或几个质粒分子，通常大的质粒如F因子等拷贝数少，复制受到严格控制。松弛控制型复制型的质粒在整个细胞周期中随时可以复制，当染色体复制已经停止时，该质粒仍然能够继续复制。该质粒在一个细胞内有许多拷贝，一般在20个以上，例如Col E1质粒及其衍生质粒，在每个细胞内约含有20多个拷贝。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素，已达到阻止染色体DNA合成而使细胞内没有蛋白质合成的情况下，由于有关复制所需要的蛋白质的缺少，染色体与严密型质粒的复制都随之停止，但松弛型质粒不受细菌这些复制蛋白的影响，如Col E1质粒或他的衍生质粒仍然继续复制12－16h，直到每个细胞中大约积累1000－2000个拷贝为止。此时质粒DNA含量甚至可达到细胞DNA总量的40－50％。 性因子（F因子）、抗药因子（R因子）和大肠杆菌素因子等都是常见的质粒。对于带有抗药基因的Col E1衍生质粒，不仅能够大量制备，又便于检出。所以，这种质粒被广泛的使用。质粒pBR322就是Col E1的衍生质粒，它带有抗氨苄青霉素和抗四环素的基因，根据该