RP-HPLC法测定血竭骨刺康胶囊中血竭素含量.docVIP

RP-HPLC法测定血竭骨刺康胶囊中血竭素含量[摘要] 目的 建立测定血竭骨刺康胶囊中血竭素含量的方法。 方法 采用RP-HPLC法。色谱柱为kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈（A）-0.05 mol/L磷酸二氢钾（B），梯度洗脱（0～20 min 35%～60%A），流速1.0 mL/min，检测波长为440 nm，柱温：30℃。 结果 血竭素高氯酸盐在0.408～2.040 μg 内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.999 8；平均回收率为96.5%，RSD = 1.3（n = 5）。 结论 本方法可用于血竭骨刺康胶囊的质量控制。 [关键词] 血竭骨刺康胶囊；血竭素；RP-HPLC；含量测定 [中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）06（c）-0065-02血竭骨刺康胶囊为新处方制剂，由川芎、皂刺、延胡索、杜仲、白芍、续断等药味制备而成。方中血竭活血生肌，消炎止痛[1]，为君药，主要有效成分为血竭素，笔者采用高效液相色谱法对血竭骨刺康胶囊中血竭素的含量进行了测定，该方法简便、准确，适用于血竭骨刺康胶囊的质量控制。 1 仪器与材料 HP1100 高效液相色谱仪（包括 HP1100工作站、紫外检测器，美国Agilent公司）。血竭素高氯酸盐对照品（中国药品生物制品检定所，批号0811-9302），磷酸二氢钾、磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯，血竭骨刺康胶囊（自制）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.05 mol/L磷酸二氢钾（B），梯度洗脱（0～20 min 35%～60%A），流速1.0 mL/min，检测波长440 nm，柱温：30℃，进样量：20 μL。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取血竭素高氯酸盐对照品，加3%的磷酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度，制成每1毫升含血竭素37 μg的溶液（血竭素重量=血竭素高氯酸盐/1.377），即得[2]。 2.3 供试品溶液的制备 取本品20粒，取出内容物，混匀，取约0.9 g，精密称重，置50 mL容量瓶中，加3%的磷酸甲醇溶液至刻度，精密称重，超声提取40 min，放冷至室温，再次精密称重，用3%的磷酸甲醇溶液补足损失的重量。摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。 2.4专属性试验 去除处方中血竭药材，按制剂工艺要求制成阴性样品，按“2.3”项下方法制成阴性供试品溶液，进样测定，结果表明，阴性样品对测定无干扰。见图1。 A：血竭骨刺康胶囊，B：血竭素高氯酸盐对照品，C：血竭骨刺康胶囊阴性对照 图１ 对照品和供试品的HPLC图谱 2.5 线性关系考察 精密称取血竭素高氯酸盐对照品10.2 mg，置50 mL量瓶中，加3%的磷酸甲醇溶液溶解，配制成对照品贮备液。分别移取1.0、1.5、2.5、3.5、5.0 mL对照品贮备液至10 mL量瓶，加3%的磷酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度为20.4、30.6、51.0、71.4和102.0 μg/mL的对照品溶液，进样量为20 μL[3-7]。以血竭素高氯酸盐对照品质量浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程为：Y = 27.527X + 8.380 6（r = 0.999 8），表明血竭素高氯酸盐在0.408～2.040 μg范围内线性良好。 2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液（批，室温条件下放置，分别于0、2、5、7、9和12 h在“2.1”色谱条件下进样分析，计算血竭素高氯酸盐峰面积RSD = 1.1。结果表明，供试品溶液室温下12 h内稳定。 2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μL，连续测定6次，记录其峰面积，RSD = 0.3，符合测定要求。 2.8 重现性试验 取同一批样品（批，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，进样后计算血竭素含量，RSD = 0.9，表明方法重复性良好。 2.9 回收率试验 取已知含量的同批样品（批5份，每份20粒。取内容物混匀，取约0.45 g，精密称定，置50 mL棕色瓶中，分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液（204 μg/mL）6 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。测定结果见表1。 2.10 样品含量测定 取三批供试品，按“2.3”项下方法操作，在“2.1”色谱条件下进样分析，测定含量，结果见表2。 3 讨论 3.1 提取方法的选择 分别考察了超声提取法和回流提取法及