低分子肝素生物活性及功能实验探究.doc

低分子肝素生物活性及功能实验探究摘要：目的研究低分子肝素增加皮肤血管通透性、改善局部血液循环的生物活性，为在化妆品中应用低分子肝素提供理论和数据支持。方法观察给药前后小鼠耳廓微循环的变化，进行比较研究。结果低分子肝素的效价越高，对微血管扩张和毛细血管开放程度影响越大，且持续时间长；低分子肝素对微循环的促进作用明显大于普通肝素；对熊果苷的皮肤渗透有促进作用。结论低分子肝素具有增加皮肤血管通透性、改善局部血液循环的生物活性，并能促进其它活性物质向皮肤渗透。 关键词：低分子肝素；生物活性；微血循环 中图分类号：R973文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)08-0003-02 低分子肝素（low molecular weight heparin, LMWH）是由不同相对分子质量硫酸糖胺聚糖组成的混合物，相对分子质量为（1～10）×103，平均为（4～5）×103。由于相对分子质量较小，具有多种优良的生物活性。它与蛋白质或内皮细胞的结合不十分牢固，从而提高了生物利用度。低分子肝素在血浆的半衰期是普通肝素的2～4倍；低分子肝素抗凝活性低，抗血栓活性高，不良反应小，更适于临床应用。10余年前低分子肝素在欧美就广泛用于临床。近年将低分子肝素用于皮肤护理已成为国外化妆品业的新热点，产品包括营养霜、眼霜、祛粉刺产品等。 低分子肝素是人体固有的多糖成分，对皮肤无任何不良作用和刺激，不仅有抗血栓作用，还有抗炎和抗过敏作用，可增加皮肤血管的通透性，改善局部血液循环，有利于皮肤的营养供给和代谢废物的排泄，对皮肤有良好的保健和养护作用。尤其是低分子肝素的透皮吸收性强，化学性质和生物活性稳定（可进行高温灭菌），是作为化妆品功能性原料应用的理论基础[1]。 1材料与方法 1.1材料 低分子肝素钠由山东福瑞达生物化工有限公司提供。 1.2方法 用体重21～28 g小鼠，腹腔注射戊巴比妥钠（5 mg/100 g体重）麻醉，耳廓皮肤涂布0.1 mL不同浓度的低分子肝素钠溶液或蒸馏水，平展在显微镜下，用计算机图像摄影观察微血管扩张（微血管管径增粗）和毛细血管开放状况（毛细血管充盈），比较小鼠耳廓微循环给药前和给药30 min后的变化。 2结果 2.1低分子肝素生物效价对微循环的影响 不同生物效价的低分子肝素对小鼠耳廓微循环有不同程度的影响（图1），效价越高影响越大，且持续时间长，表现为微血管扩张和数量不等的毛细血管开放。 2.2低分子肝素与普通肝素对微循环影响的比较 本实验比较了普通肝素（相对分子质量15×103）与3种不同产地、同效价低分子肝素对微循环的影响。结果表明，低分子肝素对微循环的促进作用明显大于普通肝素，以我国产的低分子肝素最为明显（图2）。 2.3低分子肝素促进皮肤渗透的实验研究 大多数物质对皮肤难以渗透。活性物质只有渗透到所作用的皮肤各层，才能发挥功效。许多疗效型化妆品达不到良好的效果，很大程度上是活性物质的渗透或配方基质释放活性物质的能力不足所致。因此，促渗透剂的研究成了热点。促渗透剂是指能可逆地改变皮肤角质层的屏障功能，又不损伤任何活性细胞的化学物质。氮酮为公认的促渗透剂。低分子肝素能促进微循环，除本身的生物学效应外，还可作为一种经皮渗透促进剂。 利用离体动物表皮（取3d龄大鼠完整离体皮肤经60 ℃水处理分离），研究低分子肝素对熊果苷（实验示踪剂）经皮渗透的促进作用。离体渗透实验装置：上下室玻璃渗透室（上室为供药室，下室为接受室）置入于37 ℃水浴，两室之间为离体皮肤。HPLC测定接受液中熊果苷含量。结果表明，低分子肝素有促进物质经皮肤渗透的作用（表 1）。 3讨论 微循环是微动脉和微静脉之间的血液循环。微循环最根本的功能是交换血液与组织液之间的营养物质和代谢产物。微循环组成主要由微动脉与微静脉之间的毛细血管相连。正常情况下，微循环中的毛细血管并非全部处于开放状态，如骨骼肌组织中的微循环在安静状态下，只有20 %～35 %毛细血管处于开放状态。毛细血管关闭时，其周围组织代谢产物积聚，当组织代谢活动加强时，越来越多的毛细血管开放，使血液与组织、细胞之间物质交换的面积增大，局部组织内积聚的代谢产物可被血流迅速消除。小鼠耳廓血管呈平面分布，在耳廓中部及末梢部位毛较少，用显微镜可观察到毛细血管[2]。 化妆品应用低分子肝素是一种创新。其优点是相对分子质量小，可经皮渗透；改善微循环，可使微血管扩张和毛细血管开放，有利于局部组织、细胞物质交换；本身是一种经皮渗透促进剂。主要的限制因素有：国际上少数几家公司垄断生产，成本高；产品生产多使用亚硝酸等强烈的化学解聚方法，残留的亚硝酸、硼等化学物质对人体有害。目前，我国低分子肝