Ri质粒诱导药用植物毛状根技术及应用-广东林业科技.DOC

Ri质粒诱导毛状根 杨秀淦1　高帅2　王洪峰2 (1．肇庆市国有林业总场大坑山林场 广东肇庆 526400；2．广东省林业科学研究院 ) 摘要 毛状根植物次生代谢本文发根农杆菌植物产生毛状根因毛状根培养次生代谢物在药用植物上的应用 关键词 发根农杆菌 Ri质粒 毛状根 次生代谢产物esearch Prospect on Hairy Root Culture of Medicinal Herbs Yang Xiugan1 Gao Shuai2 Wang Hongfeng3 (1. Da Keng Shan Forest Farm of National Forest Head Farm of Zhaoqing City, Zhaoqing, Guangdong, 526400; 2. Guangdong Academy of Forestry) Abstract As the wild medicinal herbs are drying up and the quality of cultured herbs is unsteady．During the past several decadespeople have paid more and more attention to researching Ri plasmid and its hairy culture system, because hairy roots can produce a lot of important secondary metabolites, and it will become an effective approach for sustainable development of medicinal resource plant. This review deals with recent development of hairy root culture for secondary metabolite and points out the prospect on hairy root cultures of medicinal herbs． KeywordsAgrobacterium rhizogees, Ri plasmid, hairy root, secondary metabolite 毛状根植物次生代谢国内外的学者毛状根培养深入研究，生产植物次生代谢产物、天然药物等方面取得了进展。本文就发根农杆菌植物产生毛状根因毛状根培养次生代谢物在药用植物上的应用1 发根农杆菌介导植物产生毛状根发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆菌属Agrobacterium）的一类具有侵染性的革兰氏阴性土壤杆菌，是一种天然的遗传转化体系。早期研究发现，发根农杆菌的致根性与其所携带的一个诱根质粒即Ri质粒有关。毛状根是由发根农杆菌感染植物细胞后，其Ri质粒的TDNA片段在植物细胞核基因组中插入整合与稳定表达的结果[-3]，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物及裸子植物，引起寄主植物患毛根病。 1.1 Ri质粒结构和功能 根据Ri质粒转化植物后产生的毛状根合成冠瘿碱的类型不同，将Ri质粒分为3种类型：甘露碱型、黄瓜碱型和农杆碱型。其中带有农杆碱型比带有甘露碱型或黄瓜碱型Ri质粒的农杆菌有更广的寄主范围。质粒具有两个主要的功能区即TDNA（转移区和Vir致病区。Vir区基因在转化过程中不发生转移，但对TDNA的转移起着非常重要的作用在通常状态下Vir区的基因处于抑制状态，当发根农杆菌感染寄主植物时，受损伤的植物细胞合成的特殊的低分子苯酚化合物乙酰丁香酮这种低分子苯酚类化合物能够刺激农杆菌，使Vir区处于抑制状态的基因被激活[]，产生一系列限制性核酸内切酶，在酶的作用下产生TDNA链，并引导TDNA链与细菌细胞膜上的特定部位结合，然后向植物细胞转移，进入植物细胞核内，TDNA随后整合进植物细胞的基因组。 1.2 发根农杆菌转化方法 诱导毛状根生成的过程包括外植体的培养和农杆菌侵染两部分[]。农杆菌侵染植株常采用以下方法[]：①直接注射法：用活化好的新鲜菌液对发芽后数天的无菌幼苗茎部进行2～3次注射接种，注射处在2周内即产生毛状根。②接种感染：对胚轴、子叶、子叶节、幼叶、未成熟的胚等外植体进行常规灭菌，用刀片切成小块或小段，用活化好的菌液进行注射涂抹或与菌液共培养，然后将外植体转移到无外源抗生素的培养基上，诱导毛状根。3～4 d后，将外植体转移至含有相应抗生素的除菌培养基上进行除菌培养。1～4周后，诱导生成的毛状根迅速伸长，并长出很多侧根。 影响发根农杆菌产生毛状根的因素 外植体类型 农杆菌Ri质粒对不同