活血利水法对兔外伤性玻璃体视网膜病变增殖膜上整合素β1表达影响.docVIP

活血利水法对兔外伤性玻璃体视网膜病变增殖膜上整合素β1表达影响摘 要：目的：探讨活血利水之散血明目片对外伤性增生性玻璃体视网膜病变（traumatic Proliferrative Vitreoretinopathy, tPVR）增殖膜（ERM）中整合素β1表达的影响及防治PVR的作用机理。方法：将40只成年有色家兔随机抽取32只，造成外伤性PVR模型，随机分成活血利水组、活血化瘀组、利水明目组、模型组，另8只为空白组。连续灌胃30天后，观察眼底PVR分级情况，免疫组织化学方法检测整合素β1表达在各组的表现及病理组织学改变。结果：在活血利水组,ERM中整合素β1阳性程度低于模型组，差异具有显著性（P 增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy ,PVR） ,指在裂孔源性视网膜脱离或视网膜复位术后,由于视网膜色素上皮（RPE） 细胞和神经胶质细胞的增生和收缩,又造成牵拉性视网膜脱离的病变。由于眼球穿通伤后的眼内纤维组织增生,称为外伤性PVR。目前认为，在炎症刺激下的纤维组织增生和玻璃体或视网膜在伤口的嵌顿，是其主要的发病机制【sup】［1］【/sup】。临床上目前主要采取玻璃体手术治疗，但手术治疗并不能有效阻止细胞的迁移增生，甚至刺激其加重，从而导致PVR的复发。外伤性PVR 在中医学归属于云雾移睛、视瞻昏渺等眼病的范畴。前期研究表明【sup】［2-3］【/sup】，散血明目片能有效清除玻璃体积血，防治tPVR，并对视网膜具有保护性作用【sup】［4］【/sup】。本实验旨在通过对实验性外伤性PVR模型兔采用活血利水法、活血化瘀法、利水明目法治疗后，对各组增殖膜（ERM）中整合素β1表达进行对比观察，进一步阐明活血利水法（散血明目片）抑制外伤性PVR的作用及其机理。 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 有色家兔40只，雌雄各半，体重2.0～2.5kg，由湖南中医药大学动物实验中心提供。 1.1.2 药品及试剂 散血明目片：由三七、酒大黄、蒲黄、猪苓、防己、地龙、白茅根、泽泻、益母草等活血通脉利水明目中药按现代制剂制备工艺制成，0.3g/片，选用同一批号药物，批号：020624。由湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。使用时研成粉末，温开水混合，浓度为100mL含散血明目片12g的混悬液。 止血去瘀明目片：由丹参、三七、赤芍、地黄、墨旱莲、茺蔚子、牡丹皮、女贞子、夏枯草、毛冬青、大黄、黄芩（酒炙）等制成，0.3g/片，选用同一批号的药物，批号：025316。陕西摩美得制药有限公司提供。使用时研成粉末，温开水混合，浓度为每100mL含止血去瘀明目片12g的混悬液。 猪苓散加减：猪苓10g，泽泻10g，茯苓15g，阿胶10g（烊），滑石10g，车前子15g。使用时煎成汤剂，浓度为100mL含生药130g。 整合素β1试剂盒：由武汉博士德公司提供。 SABC免疫组织化学试剂盒：由武汉博士德公司提供。 1.2 实验方法 1.2.1 动物分组 40只有色家兔随机抽取8只（8只眼）作为空白组（A组），其余32只（32只眼）造成右眼外伤性PVR模型，并随机分成模型组（B组）、活血化瘀组（C组、用止血去瘀明目片）、利水明目组（D组、用猪苓散）、活血利水组（E组、用散血明目片），每组8只（8只眼）。 1.2.2 富含血小板的血浆（platelet-rich plasma,PRP）的制备【sup】［5］【/sup】 用含3.8%枸橼酸钠的玻璃离心管收集健康有色家兔耳缘静脉血（静脉血与枸橼酸钠体积比为9∶1）,轻轻摇动混匀,室温下以50g之离心力离心10min,取上1/3之上清液,进行血小板计数,获得血小板浓度为5×10【sup】5【/sup】～10×10【sup】5【/sup】/mL的血浆,即PRP。 1.2.3 外伤性实验性PVR模型制作【sup】［6］【/sup】 有色家兔32只（体重2.0～2.5kg），耳缘静脉注射乌拉坦4mL/kg。每只兔选右眼为实验眼，颞上方注入透明质酸酶0.1mL并反复抽吸,再分离3～9点的球结膜和筋膜，在角膜缘后4mm处用巩膜穿刺刀刺向玻璃体中心部，勿伤及晶状体及周边视网膜，用剪刀向两侧扩大切口，伤口与视网膜平行达8mm。轻压眼球，将脱离的玻璃体剪除，用8～0尼龙线间断缝合切口。玻璃体腔中央注入0.1mL的PRP（约含50,000个血小板）。术毕予地塞米松＋庆大霉素各0.1mL球结膜下注射。造模后1周内每天用0.25%氯霉素滴眼液滴右眼，3次/天，0.5%托吡咔胺滴右眼，3次/天。 1.2.4 给药方法 造模后第3天开始给药，A组（空白组）与B组（模型组）均