Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖和凋亡的影响.docVIP

　　Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖和凋亡的影响 ：代志军，王西京，刘小旭，康华峰，管海涛，刁 岩，闵卫利，马小斌 【摘要】 目的 探讨选择性环氧化酶2(cyclooxygenase2, COX2)抑制剂Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 用不同浓度(10、20、40μmol/L)的Celecoxib处理MCF7细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Celecoxib对MCF7细胞增殖的影响；流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡；RTPCR法检测COX2基因表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平。结果 Celecoxib对乳腺癌MCF7细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性；Celecoxib可下调MCF7细胞COX2 mRNA表达。流式细胞仪结果显示：细胞周期各时相中，Celecoxib各浓度组G0/G1期阻滞，S期细胞所占的比例明显减少，有明显的诱导凋亡作用。Celecoxib可明显抑制MCF7细胞PGE2释放水平。结论 Celecoxib可有效抑制乳腺癌细胞增殖，并诱导凋亡。其机制可能与COX2表达下调、PGE2水平下降有关。 【关键词】 乳腺癌；环氧化酶；塞来昔布；细胞凋亡 ABSTRACT: Objective To investigate the effects of selective cyclooxygenase2 inhibitor Celecoxib on proliferation and apoptosis of breast cancer MCF7 cells. Methods MTT assay ine the proliferation of MCF7 cells treated by different concentration of Celecoxib after 24～96h. Floetry ed to analyze the apoptosis and cell cycle of MCF7 cells. The expression of COX2 easured by RTPCR method and levels of PGE2 easured by ELISA method. Results The inhibition of proliferation of MCF7 cells in vitro by Celecoxib e and dosedependent manners. Celecoxib effectively doechanism may be associated icroculture tetrazolium, MTT)(Gibco, USA)；碘化丙啶(propidiumiodide, PI) (Sigma公司, USA)；RTPCR试剂盒(Ampliqon公司，丹麦)；Trizol (Invitrogen, USA)；Celecoxib(辉瑞制药公司)；前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒(上海晶美生物公司)；流式细胞仪(Becon Dickinson Facsalibur公司, USA)。 1.2 细胞培养和传代 MCF7细胞在含100mL/L小牛血清、1×105u/L青霉素和100mg/L链霉素的RPMI 1640完全培养基中，37℃、50mL/L CO2、饱和湿度孵箱培养。待细胞生长呈单层铺满瓶底时，用2.5g/L的胰蛋白酶与0.2g/L EDTA按1∶1混合，消化传代。按药物浓度分为空白组、Celecoxib 10μmol/L组、Celecoxib 20μmol/L组、Celecoxib 40μmol/L组共4组。 1.3 MTT法检测不同浓度Celecoxib对MCF7细胞增殖的影响 选取对数生长期的MCF7细胞，经胰酶消化、台盼蓝染色后在血细胞计数板上计数，确保活细胞gt;97%。调整细胞浓度为每孔5×103个(每孔100μL)，加到96孔培养板中，在37℃、50mL/L CO2孵箱中培养。待细胞贴壁后，加入不同浓度(10、20、40μmol/L)Celecoxib，每个浓度设5个复孔；同时设置空白对照组和调零孔。继续培养6h，每孔加入50g/L MTT 20μL，再孵育4h。吸出上清液，加入200μL二甲基亚砜(DMSO)。在平板摇床摇10min，用酶标仪测490nm波长处每孔的吸光度(A值)。按下式 计算 细胞活力并以细胞活力对药物浓度绘制曲线。细胞活力=(实验组A值/对照组A值)×100%。 1.4 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率 取对数生长期的细胞，常规消化，制成单细胞悬液。计数并均以1×