IL18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM体外增殖及体内成瘤的影响.docVIP

　　IL18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM体外增殖及体内成瘤的影响 ：崔澂, 郝淑维, 李新伟, 白小嘉, 程建新, 单保恩 【摘要】 　　目的: 分析转染IL18基因后, 对小鼠卵巢癌OVHM细胞体外增殖、 凋亡及体内成瘤的影响, 初步探讨IL18基因转染 治疗 卵巢癌的应用价值。方法: 将逆转录病毒携带的小鼠IL18基因成功转染至OVHM（OVHM/IL18）, 以空载体转染的OVHM（OVHM/LXSN）和野生型（OVHM）作为对照。分别采用MTT、 FCM检测体外培养细胞的增殖、 凋亡及周期分布。于裸鼠皮下分别接种细胞, 观察各组种植瘤生长情况, 计算 成瘤率; RTPCR检测瘤组织中IL18 mRNA表达; FCM和电镜分析肿瘤细胞增殖、 凋亡状况。结果: 3组细胞的体外增殖未见明显差异, 均无明显凋亡现象, 增殖指数、 细胞周期分布均无明显差异（均Pgt;0.05）。接种后, 3组裸鼠的成瘤率相同, 但OVHM/IL18组成瘤时间较晚, 随瘤龄增长肿瘤生长缓慢, 瘤组织中IL18 mRNA阳性表达。OVHM/IL18组裸鼠种植瘤细胞可见典型的凋亡现象, G0/G1期细胞明显增多, S期细胞明显减少, 增殖指数明显降低, 凋亡指数明显增高（Plt;0.01）。结论: IL18基因成功转染后, 虽对体外卵巢癌细胞无直接毒性, 但可能在体内借助非直接杀伤的其他途径, 通过阻断细胞周期、 促进肿瘤细胞凋亡等抑制体内成瘤。 【关键词】 IL 18 基因转染 OVHM 增殖 凋亡 成瘤 　　［Abstract］ AIM: To investigate the effects of IL18 gene transfection on proliferation, apoptosis and tumorigenesis of mouse ovarian cancer cell line OVHM. METHODS: OVHM easured by MTT and FCM respectively. The nude mice or’s groorigenesis ratio ade. The expression of IL18 mRNA in tumor tissues or cell in tissue icroscope and FCM. RESULTS: The three cells cultured in vitro shoorigenesis ilar in all the three groups. But in OVHM/IL18 group, the latent period of tumorigenesis or groRNA in tumor tissue. It or cells from nude mice inoculated by OVHM/IL18, the cells in phase of G0/G1 increased orphology of apoptosis, and those in S phase decreased origenesis of OVHM in vivo or cells. 　　［Keyorigenesis 　　IL18是1995年发现的具有抗瘤作用的重要免疫调节因子［1］; 卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一, 死亡率位居女性生殖系统肿瘤首位［2］。研究证实,随着卵巢组织从正常向良性及恶性肿瘤的转变, 组织中IL18 mRNA及蛋白表达递减直至缺如［3］。提示, 若将IL18基因导入卵巢癌细胞, 纠正其缺陷表达, 则可能有效诱导IL18的抗瘤效应。因此, 我们研究了IL18基因成功转染至小鼠卵巢癌OVHM细胞后, 对体外肿瘤细胞的直接杀伤及体内成瘤的影响, 初步探讨将IL18基因作为优选靶对卵巢癌进行基因治疗的可行性。 　　 1 材料和方法 　　1.1 材料 OVHM由日本大阪大学医学院Hiromi Fujia公司产品; TRIzol为美国Gibco公司产品; RTPCR试剂盒为华美生物工程公司产品; βactin、 IL18引物序列查自GenBank, 经Premier5.0软件分析核对, 由上海生工生物技术有限公司合成。ABI5700型PCR循环仪为美国ABI公司产品; FOTODYNE602107型凝胶成像分析系统为美国Image公司产品; H500型透射电镜为日本日立公司产品; Mk353型酶联免疫检测仪为芬兰ThermoLabsystems产品; Vantage流式细胞仪为美国BD公司产品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 小鼠IL18基因转染OVHM细胞 分别取达80%融合的PA317/