β┐胡萝卜素对病毒转化细胞的影响.docVIP

　　β┐胡萝卜素对病毒转化细胞的影响 【关键词】 ,β-胡萝卜素 关键词: β-胡萝卜素;293细胞;Raji细胞 摘 要:目的 探讨β-胡萝卜素（β-C）对病毒转化细胞的抑制作用. 方法 体外培养人腺病毒转化的293细胞和EB病毒转化的Raji细胞，培养时添加0，10，50和100μmol L-1 的β-C作用24，48和72h后，进行细胞计数，测定细胞生长抑制率;ELISA-结晶紫方法测定A值，计算细胞存活量;采用快速CPE（细胞病变）方法测定复制缺陷型腺病毒在293细胞上的病毒滴度. 结果 10～100μmol L-1 的β-C对293细胞和Raji细胞均有抑制作用，细胞存活量减少，抑制率分别是15.6%，10.1%（10μmol L-1 ）;19.7%，22.4%（50μmol L-1 ）和33.6%，29.3%（100μmol L-1 ），Plt;0.05.快速CPE结果显示加入β-C后，复制缺陷型腺病毒在其辅助细胞-293细胞上的复制增殖能力明显下降，病毒滴度降低，空斑形成单位（×109 pfu L-1 ）分别为98±41（10μmol L-1 ），75±29（50μmol L-1 ）和63±31（100μmol L-1 ），与对照组185±25（0μmol L-1 ）相比，Plt;0.05. 结论 β-C对病毒转化的293细胞和Raji细胞的生长增殖具有明显的抑制作用，对293细胞内整合的腺病毒早期基因E1的表达具有下调作用. 　　Keyed cells.METHODS Human adenovirus transforming293cells and EB virus transforming Raji cells edium containing0，10，50and100μmol L-1 beta-carotene for24，48and72h.Cells ethod ethod easure the titer of replicate-defect adenovirus in293cells.RESULTS Beta-carotene at concentrations of10～100μmol L-1 inhibited significantly the proliferation of293cells and Raji cells（Plt;0.05）.Inhibition percentages ol L-1 ），19.7%，22.4%（50μmol L-1 ）and33.6%，29.3%（100μmol L-1 ），respectively.The survival cells decreased obviously.The titer of replicate-defect adenovirus in293cells dropped significantly（Plt;0.05）.Plaque formation unit（×109 pfu L-1 ）ol L-1 ），75±29（50μmol L -1 ）and63±31（100μmol L-1 ），respectively.CONCLUSION Beta-carotene can inhibit proliferation of293cells and Raji cells and dog L-1 ，牛血清100mL L-1 ，pH7.0.Raji细胞的培养基为RPMI1640. 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞生长抑制率的测定 取对数生长期细胞分散计数后，分别加入不同浓度β-C（0，10，50和100μmol L-1 ）进行培养，并在24，48和72h作细胞计数，每组3瓶，计数2次，取平均值，计算细胞生长抑制率. 　　细胞生长抑制率=（对照组细胞数-实验组细胞数）/（对照组细胞数）×100% 　　1.2.2 细胞存活量测定 取96孔细胞培养板，每孔加入处于对数生长期的含不同浓度的β-C细胞悬液，每孔200μL，设8个复孔，37℃培养3d，取平行板，按ELISA-结晶紫方法，在酶联仪上测A值，计算细胞存活量. 　　1.2.3 复制缺陷型腺病毒滴度测定 取复制缺陷型腺病毒Ad5E1- （由解放军军需大学提供），以每细胞10个空斑形成单位（pfu cell-1 ）的感染强度接种处于对数生长期的293细胞，单层吸附30min后，分别加入3mL含不同浓度的β-C培养液，48h后冻融收集病毒培养液（同一浓度β-C混合），采用快速CPE分析方法测定各β-C浓度组Ad5E1- 病毒滴度:即将293细胞接种于一块6孔培养板，接种量为2×106 细胞 孔-1 ，约24～36h后，细胞长至90.0%汇合状态，将