中药抗癌灵对肝癌SMMC7721细胞增殖的影响.docVIP

　　中药抗癌灵对肝癌SMMC7721细胞增殖的影响 ：韦鹏涯，浦洪琴，韦星，李朝敢，农嵩 【摘要】 　　目的 观察中药抗癌灵（Kangailing, Ka）对人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响并探讨其可能分子机制。方法 提取、配制不同抗癌灵生药浓度，作用于体外培养的人肝癌SMMC7721细胞，采用MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪法检测凋亡率，二步法免疫组化检测野生型P53、NFкB P65和Bcl2蛋白表达变化。结果 与正常对照组比较，Ka各浓度组细胞抑制率显著上升（P＜0.001），细胞凋亡率明显升高（P＜0.01或P＜0.001），P53蛋白表达显著上升（P＜0.001），NFкB和Bcl2蛋白表达明显下降（P＜0.001）。结论 Ka通过诱导细胞凋亡而抑制肝癌SMMC7721细胞增殖，其分子机制可能与上调野生型P53蛋白表达，下调NFкB P65和Bcl2蛋白表达有关。 【关键词】 中药 抗癌灵 肝癌 细胞增殖 细胞凋亡 基因表达 　　【Abstract】 Objective To observe the effects of traditional Chinese medicine Kangailing on proliferation in human hepatoma SMMC7721 cell lines in vitro and investigate its possible molecular mechanism.Methods The proliferation inhibitory rate ined by floetry. The expression of munhistochemical staining.Results The cell inhibitory rate and apoptotic rate and the expression of P53 Protein of Ka treatment groups increased obviously than that of control group (P＜0.001), arkedly(P＜0.001). Conclusion Kangailing could inhibit the proliferation of SMMC7721 cells in vitro by inducing cancer cell apoptosis, and its molecular mechanism may be associated edicine;Kangailing;liver cancer;proliferation;apoptosis;gene expression. 　　肿瘤不仅是细胞增殖和分化异常的疾病，也是细胞凋亡异常的疾病。越来越多证据表明，中药抗癌的疗效与中药诱导肿瘤细胞凋亡有关。许多天然药物可以通过干扰肿瘤细胞生长、代谢和增殖等过程，最终诱导触发肿瘤细胞发生凋亡，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的作用［1，2］。复方中药抗癌灵(Kangailing，Ka)由白英、白花蛇舌草、半枝莲和半边莲等中草药组成，具有清热解毒、活血化瘀等功效。临床上该复方广泛应用于各种癌症的 治疗 ，尤其对肝癌、肺癌、胃癌及鼻咽癌等有较好的疗效。本研究通过观察中药Ka对人肝癌SMMC7721细胞增殖作用的影响，旨在探讨其分子作用机制，为该复方中药应用于肝癌的临床治疗提供理论依据。 　　 材料和方法 　　 1.材料 　　人肝癌SMMC7721细胞株由中科院上海细胞生物研究所细胞库提供，胎牛血清(FBS)、RPMI 1640培养基为GIBCO公司产品，四甲基偶氮唑蓝（MTT）为上海普飞生物技术有限公司产品，碘化丙啶(propidium iodide,PI)为Sigma公司产品，鼠抗人NFкB P65、野生型P53和Bcl2单克隆抗体为Santa cruz公司产品，Pos K3酶标仪（芬兰雷勃公司），BX51型显微镜（OLYMPUS，日本），流式细胞仪(Becton Dickinson,USA) 。 　　 2.方法 　　（1）药物提取 取复方中药抗癌灵(购买于百色市中 医院 中药房)干品100 g，用1000 ml水浸泡1 h，加热煮沸后小火煎熬60 min，室温冷却，120目网筛过滤，弃药渣，滤液离心(3 000 r/min×20 min×2次)。取上清液，浓缩至50 ml，调pH值为7.0～7.2，0.22 μm过滤除菌，获生药含量为2.0 g/ml 的Ka水提液,5 ml/瓶分装，-20℃保存备用，实验时将含10ucirc;S的RPMI 1640培养液稀释至所需的药物浓度。 　　（2）细胞培养和