吡格列酮对糖尿病大鼠肾皮质血管内皮生长因子表达的影响.docVIP

　　吡格列酮对糖尿病大鼠肾皮质血管内皮生长因子表达的影响 ：阚春婷， 吴晨光， 张明， 王丽 【摘要】 目的： 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial grog/kg）建立糖尿病模型，将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(DM组) 、糖尿病吡格列酮（ pioglitazone 10 mg·kg-1·d-1）干预组（DP组），并以正常组（NC 组）作对照。②干预8周后，观察各组大鼠24 h尿蛋白（mg/24 h）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血糖及血脂的变化；用免疫组织化学和逆转录PCR检测肾皮质VEGF蛋白及mRNA表达。结果： ①DM组大鼠24h尿蛋白、BUN、Scr、肾皮质VEGF蛋白及mRNA表达均较NC组明显升高；DP组大鼠24 h尿蛋白、BUN、Scr、肾皮质VEGF蛋白及 mRNA表达较DM组均有降低。②DM组血糖、血脂与NC组相比，差异有统计学意义，与DP组比较差异无统计学意义。结论： 糖尿病大鼠肾皮质VEGF表达增强，吡格列酮可抑制糖尿病大鼠肾皮质VEGF的表达，减少尿蛋白，改善肾功能，延缓糖尿病肾病的发生、 发展 ，发挥非降糖的直接肾保护作用。 【关键词】 糖尿病肾病； 吡格列酮； 血管内皮生长因子 ［Abstract］ Objective: To investigate the effect of pioglitazone on the expression of vascular endothelial groodel g/kg), and diabetic rats ly divided in to 2 groups: untreated diabetes mellitus group(DM group)，pioglitazone treated diabetes mellitus group(DP group 10 mg·kg-1d-1). In addition, the normal rats served as a normal control group(NC group). Eight urea nitrogen, serum creatinine, blood glucose and serum tipids munohistochemisty and Reverse transcriptionPCR. Results： pared urea nitrogen and serum creatinine in DM group urea nitrogen and serum creatinine RNA expression after treatment group. Blood glucose and serum lipids profile eliorate renal function, echanism may be some direct nephroprotective effects. ［Key g·kg-1·d-1，江苏恒瑞药业提供）。禁食24 h后，DM及DP组单次腹腔注射链尿佐菌素（STZ）（0.1 mol/L无菌枸橼酸缓冲液配制，6.5 mg/ml，pH4.3，55.0 mg/kg）；NC组单次腹腔注射同等剂量的枸橼酸缓冲液。72 h后采尾静脉血，以美国强生血糖仪测定血糖，高于16.7 mmol/L者入组。DP组予以吡格列酮混悬液灌胃，NC，DM组予以相应量生理盐水灌胃。 1.2 标本收集 干预8周后，处死大鼠。处死前代谢笼收集24 h尿，记尿量，待测尿蛋白。处死当天尾静脉采血测血糖，以氯胺酮（10 mg/kg）腹腔注射麻醉各组大鼠，心脏取血3 ml，分离血清，待测血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）及血脂。肾脏经生理盐水灌洗后除肾包膜测肾重，肾脏肥大指数(KI)以肾重/体质量×1 000表示。右侧肾脏-70℃冻存以备逆转录PCR检测。左侧肾脏取部分肾皮质于4%低聚甲醛固定，石蜡包埋，制成4 μm切片，以备肾脏病理检查及免疫组织化学检测。 1.3 血、尿标本检测 用日本爱科来GT1810型血糖仪（葡萄糖氧化酶法）尾静脉采血测定血糖，用日本奥林帕斯AU2700全自动生化分析仪测定血脂、血Cr、血BUN，用双缩脲法测定24 h尿蛋白。 1.4 免疫组织化学检测 所有标本按常规方法固定，包埋，切片厚4 μm，行HE染色。采用EnVision法检测肾组织中VEGF。石蜡切片脱蜡至水后加抗原修复液，滴加兔抗大鼠VEGF 抗体(1∶200，博士德公司)，4 ℃过夜，加生物素标记的羊抗兔二抗（1∶50, Sigma公司），滴加新配制的ABC复合物、DAB 显色剂，苏木精复染，脱水，透明，甘油明胶封固，以PBS 代替一